RIPA Lysis बफर (मजबूत)

RIPA Lysis बफर कोशिकाओं और ऊतकों के लिए एक पारंपरिक तीव्र लसीका समाधान है। यह विभिन्न प्रकार के फॉर्मूलेशन में उपलब्ध है और इसे मजबूत, मध्यम या कमजोर के रूप में वर्गीकृत किया गया है। आरआईपीए मजबूत लसीका समाधानों में ऊतकों और कोशिकाओं के लसीका से प्राप्त प्रोटीन नमूनों का उपयोग नियमित पृष्ठ, पश्चिमी और अन्य प्रयोगों के लिए किया जा सकता है जहां प्रोटीन गतिविधि की सख्त आवश्यकता नहीं होती है। इस उत्पाद में 50 mM ट्रिस-एचसीएल (पीएच 7.4), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA{{6}Na, 1% ट्राइटन . यह जानवरों या पौधों के ऊतकों और कोशिकाओं के लिए उपयुक्त है, लेकिन इसका उपयोग कवक या जीवाणु नमूनों के लिए भी किया जा सकता है।

गीली बर्फ के साथ जहाज; 2-8 डिग्री पर अंधेरे में स्टोर करें; 18 महीने के लिए वैध.

प्रयोग की तैयारी

स्व-प्रदत्त प्रोटीज़ अवरोधकों की आवश्यकता होती है। प्रोटीन क्षरण को रोकने के लिए उपयोग से पहले प्रोटीज़ इनहिबिटर (G2006, G2007, G2008, आदि) को RIPA Lysis (स्ट्रॉन्ग) में जोड़ा जाना चाहिए। निम्नलिखित निर्देशों में RIPA Lysate (Strong) के सभी संदर्भ प्रोटीज़ अवरोधकों के साथ जोड़े गए हैं।

एल ऊतक के नमूनों के लिए

1. खून के धब्बे हटाने के लिए ऊतक के टुकड़ों को प्री-कूल्ड पीबीएस (जी4202 अनुशंसित) से धोया जाता है, छोटे टुकड़ों में काटा जाता है और होमोजेनाइज़र में रखा जाता है।

2. RIPA लाइसिस बफर (मजबूत) के ऊतक की मात्रा का 10 गुना जोड़ें और कम तापमान पर समरूप करें (उच्च गति वाले ऊतक पीसने वाले उपकरण KZ-III-F और KZ-III-FP का उपयोग करने की अनुशंसा की जाती है, जो स्वतंत्र रूप से विकसित और उत्पादित होता है) सर्विसबायो द्वारा)। ध्यान दें कि RIPA लाइसेट (मजबूत) की मात्रा लगभग 50 मिलीग्राम ऊतक और 1 एमएल लाइसेट के अनुपात में जोड़ी जा सकती है। यदि ऊतक प्रोटीन की मात्रा कम है, तो कच्चे अर्क के घोल में प्रोटीन की सांद्रता बढ़ाने के लिए लाइसेट की मात्रा को कम किया जा सकता है।

3. होमोजेनेट को 1.5 एमएल सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में स्थानांतरित करें और दोलन करें। ऊतक कोशिकाओं की पूर्ण लसीका सुनिश्चित करने के लिए हर 10 मिनट में बार-बार पाइपिंग के साथ 30 मिनट तक बर्फ स्नान करें।

4. 5 मिनट के लिए 12000 xg पर सेंट्रीफ्यूज करें और सतह पर तैरनेवाला को कुल प्रोटीन समाधान के रूप में एकत्र करें।

एलअनुयायी कोशिका नमूनों के लिए

1. कोशिकाओं को पीबीएस से 2-3 बार धोएं और आखिरी समय में बचे हुए तरल को अच्छी तरह से सोख लें।

2. सेल कल्चर प्लेट और फ्लास्क में 250 μL सेल लाइसेट प्रति वेल प्लेट के अनुपात में एस्पिरेट RIPA लाइसिस बफर (स्ट्रॉन्ग) डालें, लाइसेट को पूरी तरह से संपर्क में लाने के लिए कल्चर प्लेट और फ्लास्क को बार-बार हिलाएं। 3-5 मिनट के लिए कोशिकाएं।

3. सेल स्क्रेपर से कोशिकाओं को खुरचें और एक सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में इकट्ठा करें।

4. 30 मिनट तक बर्फ पर लिसिस।

5. 5 मिनट के लिए 12000 xg पर सेंट्रीफ्यूज करें और सतह पर तैरनेवाला को कुल प्रोटीन समाधान के रूप में एकत्र करें।

एल सस्पेंशन सेल नमूनों के लिए

1. कोशिकाओं को एकत्रित करने के लिए सेंट्रीफ्यूज।

2. साइटोसोल को RIPA Lysis बफर (स्ट्रॉन्ग) के साथ एक 6- वेल प्लेट के प्रति सेल वेल में 250 μL लाइसेट के अनुपात में मिलाएं और हिलाएं।

3. 30 मिनट के लिए बर्फ स्नान, पूर्ण कोशिका विश्लेषण सुनिश्चित करने के लिए हर 10 मिनट में बार-बार पाइपिंग।

4. 5 मिनट के लिए 12000 xg पर सेंट्रीफ्यूज करें और सतह पर तैरनेवाला को कुल प्रोटीन समाधान के रूप में एकत्र करें।

एल बैक्टीरिया या फंगल नमूनों के लिए

1. सस्पेंशन का 1 एमएल निकालें, सतह पर तैरनेवाला हटाने के लिए सेंट्रीफ्यूज करें और तरल को पूरी तरह से हटाने के लिए पीबीएस के साथ एक बार धोएं। जितना संभव हो सके जीवाणु को फैलाने के लिए भंवर।

2. लाइसेट के साथ अच्छी तरह से मिश्रण करने के लिए धीरे-धीरे RIPA Lysis बफर (मजबूत) और भंवर का 100-200 μL जोड़ें।

3. 30 मिनट के लिए बर्फ स्नान, पूर्ण कोशिका लसीका सुनिश्चित करने के लिए हर 2 मिनट में बार-बार पाइपिंग।

4. 5 मिनट के लिए 12000 xg पर सेंट्रीफ्यूज करें और सतह पर तैरनेवाला को कुल प्रोटीन समाधान के रूप में एकत्र करें।

1. लाइज़ किए जाने पर ऊतक या कोशिकाएं चिपचिपी दिखाई दे सकती हैं। इसे पिपेटर से बार-बार फूंक मारकर या वोर्टेक्सर से हिलाकर तब तक प्राप्त किया जा सकता है जब तक कि यह तरल न हो जाए। यदि यह गाढ़ा रहता है तो इसमें उचित मात्रा में लाइसिस घोल मिलाएं।

2. इस अभिकर्मक में प्रोटीज़ अवरोधक नहीं हैं। उपयोग से पहले अपने स्वयं के प्रोटीज़ अवरोधक जोड़ें। G2006, G2007, G2008 और हमारी कंपनी के अन्य संबंधित प्रोटीज़ अवरोधक अनुशंसित हैं।

3. अपनी सुरक्षा और स्वास्थ्य के लिए, कृपया सुरक्षा चश्मा, दस्ताने या सुरक्षात्मक कपड़े पहनें।

केवल अनुसंधान उपयोग के लिए!

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