कूमैसी ब्रिलियंट ब्लू जी250

कूमैसी ब्रिलियंट ब्लू G250 प्रोटीन को तेजी से बांध सकता है। कूमैसी ब्रिलियंट ब्लू जी250 का अधिकतम अवशोषण मुक्त अवस्था में 488 एनएम है। प्रोटीन से बंधने के बाद, अधिकतम अवशोषण 595 एनएम में बदल गया। ऑप्टिकल अवशोषण मान प्रोटीन सामग्री के समानुपाती होता है, इसलिए इसका उपयोग प्रोटीन की मात्रात्मक पहचान के लिए किया जा सकता है। इस उत्पाद का उपयोग G2001 ब्रैडफोर्ड परख प्रोटीन मात्रात्मक पहचान किट के पूरक के रूप में भी किया जा सकता है।

कमरे के तापमान पर शिप करें और स्टोर करें, 12 महीने के लिए वैध।

1. (वैकल्पिक) मानक वक्र बनाना (माइक्रोप्लेट रीडर विधि): 0.5 मिलीग्राम/एमएल प्रोटीन मानक कार्यशील घोल तैयार करने के लिए बीएसए को पानी में घोलें। प्रोटीन मानक कार्यशील घोल को 96-वेल प्लेट में 0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20 μL के स्तर पर जोड़ा जाता है, और फिर ग्रेडिएंट वर्किंग समाधान को पीबीएस या खारा के साथ 20 μL तक पूरक किया जाता है। प्रोटीन सांद्रता के क्रमिक वक्र 0, 25, 50, 100, 200, 300, 400 और 500 ug/mL हैं। यदि केवल सापेक्ष मात्रात्मक तुलना की जाती है, तो किसी मानक वक्र की आवश्यकता नहीं होती है।

2. परीक्षण के लिए नमूना तैयार करें: परीक्षण किए जाने वाले प्रोटीन के नमूने को उचित रूप से पतला किया जाता है (परीक्षण के परिणाम की विश्वसनीयता सुनिश्चित करने के लिए, नमूने की प्रोटीन सांद्रता को मानक वक्र की सीमा के भीतर पूर्व-प्रयोग द्वारा पता लगाया जा सकता है) ), और प्रत्येक नमूने का 20 μL वेल प्लेट में जोड़ा जाता है। परीक्षण किए जाने वाले नमूने को प्रोटीन मानक के समान घोल में पतला किया जाना चाहिए।

3. जांच: प्रत्येक कुएं में 2 00 μL कूमासी ब्रिलियंट ब्लू G250 घोल डाला जाता है और अच्छी तरह से मिलाया जाता है (96- कुएं की प्लेट को थरथरानवाला पर 30 सेकंड के लिए रखा जा सकता है)। कमरे के तापमान पर 3-5 मिनट के बाद, मानक वक्र संख्या 0 को संदर्भ के रूप में उपयोग किया जाता है, और वर्णमिति माप 595 एनएम तरंग दैर्ध्य पर किया जाता है, और प्रत्येक कुएं का अवशोषण मूल्य दर्ज किया जाता है।

4. गणना: मानक वक्र में ग्रेडिएंट प्रोटीन सामग्री (यूजी/एमएल) को एब्सिस्सा के रूप में लिया जाता है, और प्रकाश अवशोषण मान को मानक वक्र खींचने के लिए कोटि के रूप में लिया जाता है। नमूने के अवशोषण मूल्य के अनुसार, संबंधित कुएं में मापे जाने वाले नमूने की प्रोटीन सांद्रता को मानक वक्र (यूजी/एमएल) पर पाया जा सकता है, और फिर नमूने के कमजोर पड़ने से गुणा किया जा सकता है, वास्तविक प्रोटीन सांद्रता मापा जाने वाला नमूना.

5. इसके अलावा: यदि स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग निर्धारित करने के लिए किया जाता है, तो ग्लास टेस्ट ट्यूब या ग्लास कलरिमेट्रिक ट्यूब का उपयोग मानक वक्र बनाने के लिए प्रतिक्रिया पोत के रूप में किया जाता है। परीक्षण किए जाने वाले प्रोटीन नमूने को उचित रूप से पतला करने के बाद, इसे 1 एमएल के नमूना आकार के साथ एक नई ग्लास टेस्ट ट्यूब या कलरिमेट्रिक ट्यूब में जोड़ें। मानक कर्व ग्रेडिएंट ट्यूब और सैंपल ट्यूब में 3 एमएल कूमैसी ब्रिलियंट ब्लू जी250 सॉल्यूशन मिलाएं, अच्छी तरह मिलाएं, कमरे के तापमान पर 3-5 मिनट तक रखें, फिर कलरिमेट्रिक पता लगाने के लिए स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करें।

6. पता लगाना: स्पेक्ट्रोफोटोमीटर की तरंग दैर्ध्य 595 एनएम पर सेट है, और मानक वक्र और परीक्षण किए जाने वाले नमूने को संदर्भ के रूप में मानक वक्र संख्या 0 ट्यूब के साथ शून्य किया गया है। चरण 4 में बताए अनुसार मानक वक्र बनाए जाते हैं और परीक्षण किए जाने वाले नमूनों में प्रोटीन सांद्रता की गणना की जाती है।

1. उपयोग से पहले उत्पाद को कमरे के तापमान पर लाया जाना चाहिए, और उल्टा मिलाया जाना चाहिए ताकि पहचान की संवेदनशीलता प्रभावित न हो।

2. अपनी सुरक्षा और स्वास्थ्य के लिए, कृपया सुरक्षा चश्मा, दस्ताने या सुरक्षात्मक कपड़े पहनें।

केवल अनुसंधान उपयोग के लिए!

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