PEI 40K अभिकर्मक अभिकर्मक

PEI 40K ट्रांसफ़ेक्शन अभिकर्मक (रैखिकीकृत पॉलीइथाइलीनमाइन ट्रांसफ़ेक्शन अभिकर्मक) 40 के आणविक भार के साथ एक अत्यधिक आवेशित धनायनित बहुलक है, जो कि रैखिककृत पॉलीइथिलीनमाइन पर आधारित है, जो सकारात्मक रूप से चार्ज होता है और एक कॉम्प्लेक्स बनाने के लिए नकारात्मक रूप से चार्ज किए गए न्यूक्लिक एसिड को प्रभावी ढंग से बांध सकता है। उन्हें और कोशिकाओं में पेश करें, और यह कोशिकाओं में प्लास्मिड डीएनए के ट्रांसफ़ेक्शन के लिए उपयुक्त है। पीईआई 40K (लीनियराइज्ड पॉलीइथाइलीनमाइन) ट्रांसफेक्शन अभिकर्मक में कम साइटोटॉक्सिसिटी, उच्च ट्रांसफेक्शन दक्षता और कम लागत होती है, जो इसे लिपोसोम-आधारित ट्रांसफेक्शन अभिकर्मकों की तुलना में बहुत लागत प्रभावी बनाती है। यह प्रमाणित किया गया है कि रैखिक PEI 40K अभिकर्मक अभिकर्मक का व्यापक रूप से HEK{7}}, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/ सहित विभिन्न प्रकार की सेल लाइनों में उपयोग किया जाता है। 3T3, Sf9, HepG2, और हेला कोशिकाएं आदि, जिनकी ट्रांसफ़ेक्शन क्षमता 80% ~ 90% तक है। इस उत्पाद का मुख्य घटक PEI 40K की सांद्रता 1 mg/mL है।

गीली बर्फ के साथ जहाज; -20 डिग्री पर स्टोर करें, 6 महीने के लिए वैध। या 4 डिग्री पर स्टोर करें, 3 महीने के लिए वैध।

1. अनुवर्ती कोशिकाओं के ट्रांसफ़ेक्शन से पहले तैयारी (6-वेल प्लेट, अन्य विशिष्टताओं के लिए संदर्भ तालिका):

ए) अभिकर्मक से एक दिन पहले, कोशिकाओं को छिद्र प्लेटों में समान रूप से लगाया जाना उचित था

औपचारिक अभिकर्मक पर 70-85% तक अभिसरण करने के लिए उपयुक्त घनत्व;

बी) अभिकर्मक से पहले, प्राथमिक कोशिका मीडिया को हटा दिया गया था और सीरम या कम सीरम (5% से नीचे), या ऑप्टी-एमईएम के बिना 1.8 एमएल बेस माध्यम को बदलने से पहले पीबीएस के साथ 1-2 बार धोया गया था; विशिष्ट कोशिका प्रकार के आधार पर विभिन्न कोशिकाओं में अलग-अलग सीरम निर्भरता होती है;

सी) संलग्न कोशिकाओं को इनक्यूबेटर में रखा गया और ट्रांसफ़ेक्शन कॉम्प्लेक्स की तैयारी शुरू की गई।

2. सस्पेंशन कोशिकाएं अभिकर्मक से पहले तैयार की गईं:

ए) अभिकर्मक के दिन, माध्यम को हटाने के लिए उचित मात्रा में कोशिकाओं को सेंट्रीफ्यूज किया गया

और बिना सीरम या कम सीरम (5% से नीचे) के बिना बेसल माध्यम के साथ पुन: निलंबित;

बी) तैयार सस्पेंशन कोशिकाओं को इनक्यूबेटर में रखा गया और तैयारी शुरू कर दी गई

अभिकर्मक परिसरों, और अभिकर्मक परिसरों और माध्यम के बीच मात्रा अनुपात हो सकता है

उचित समायोजन के लिए अनुवर्ती कोशिकाओं के संदर्भ में किया जाना चाहिए।

3. ट्रांसफ़ेक्शन कॉम्प्लेक्स तैयार किए गए:

ए) तैयारी तरल ए: 100 μL सीरम-मुक्त बेस माध्यम और 2 ug प्लास्मिड डीएनए, ब्लोइंग और

मिश्रित;

बी)तरल बी की तैयारी: सीरम के बिना आधार माध्यम का 100 एल और 6-8 μL पीईआई 40 के अभिकर्मक

अभिकर्मक, उड़ाना और मिश्रण;

सी) समाधान बी को तरल ए में जोड़ा गया था, धीरे से उड़ाया गया और मिश्रित किया गया, और कमरे के तापमान पर ऊष्मायन किया गया

डीएनए-पीईआई ट्रांसफ़ेक्शन कॉम्प्लेक्स बनाने के लिए 15 मिनट।

4. ट्रांसफ़ेक्ट कोशिकाएं:

ए) पिछले चरण में प्राप्त ट्रांसफ़ेक्शन कॉम्प्लेक्स को पहले से बदली गई होल प्लेट में जोड़ें

समाधान को पार करना या घेरना;

बी) प्लेट "8" को हिलाएं या किसी अन्य तरीके से पूरी तरह मिश्रित करें और 37 डिग्री, 5% सीओ2 इनक्यूबेटर में इनक्यूबेट करें;

सी) 4-6 घंटे के लिए कोशिकाओं के साथ डीएनए-पीईआई ट्रांसफ़ेक्शन कॉम्प्लेक्स ने बेहतर ट्रांसफ़ेक्शन दक्षता दिखाई,

उचित विस्तार या रात भर ऊष्मायन और बेहतर अभिकर्मक दक्षता।

1. कृपया स्वस्थ कोशिकाओं को अच्छी स्थिति में उपयोग करें और पुनर्प्राप्त कोशिकाओं को अभिकर्मक से पहले कम से कम 2 बार पारित करने की सिफारिश की जाती है।

2. कृपया उच्च गुणवत्ता वाले, एंडोटॉक्सिन-मुक्त, प्लास्मिड डीएनए का उपयोग करें।

3. प्रारंभिक उपयोग के लिए, यह अनुशंसा की जाती है कि उत्पाद को बार-बार जमने और पिघलने से बचाने के लिए वितरित किया जाए।

4. अभिकर्मक के समय सीरम की उच्च सांद्रता, साथ ही एंटीबायोटिक दवाओं का उपयोग, कोशिका की स्थिति के साथ-साथ अभिकर्मक दक्षता को भी प्रभावित कर सकता है।

5. विभिन्न कोशिका सहनशीलता, संवेदनशीलता, अभिकर्मक ऊष्मायन समय की लंबाई, और पीईआई/डीएनए उपयोग अनुपात को उपयुक्त के रूप में समायोजित किया गया था।

6. ऑपरेशन के समय कृपया प्रयोगात्मक सूट और डिस्पोजेबल दस्ताने पहनें।

अनुसूची: विभिन्न सेल कल्चर कंटेनरों में अभिकर्मक का उपयोग (केवल संदर्भ के लिए)

केवल अनुसंधान उपयोग के लिए!

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