IF488-गेहूं रोगाणु एग्लूटीनिन（WGA, हरी बत्ती）

 

प्रोडक्ट का नाम	बिल्ली। नहीं.	विशेष.
iF488-गेहूं रोगाणु एग्लूटीनिन (डब्ल्यूजीए, हरी बत्ती)	G1730	100UL

 

 

व्हीट जर्म एग्लूटीनिन (डब्ल्यूजीए) एक लेक्टिन है जो एन-एसिटाइल-डी-ग्लूकोसामाइन और सियालिक एसिड से बंधता है, और लेक्टिन के सबसे अधिक अध्ययन और व्यापक रूप से उपयोग किए जाने वाले वर्गों में से एक है। यह वर्तमान में लेक्टिन का सबसे अधिक अध्ययन किया जाने वाला और व्यापक रूप से इस्तेमाल किया जाने वाला वर्ग है। डब्ल्यूजीए ग्लाइकोकोन्जुगेट्स से जुड़ता है, और इसके डेरिवेटिव और संयुग्मों का व्यापक रूप से प्रतिदीप्ति इमेजिंग और विश्लेषण के लिए कोशिका झिल्ली और फाइब्रोटिक निशान ऊतकों को लेबल करने के लिए उपयोग किया जाता है। डब्लूजीए की कार्बोहाइड्रेट-बाइंडिंग विशिष्टता को -1,4-ग्लकएनएसी-लिंक्ड अवशेषों के अनुक्रम की ओर निर्देशित किया जाता है, जिन्हें चिटिन डेक्सट्रिन के रूप में जाना जाता है। प्रत्येक मोनोसैकेराइड में दो समान, गैर-अंतःक्रियात्मक बंधन स्थल होते हैं जो तीन या चार -1,4-GlcNAc इकाइयों के पूरक होते हैं। परीक्षण किए गए मोनोसैकराइडों में से, केवल GlcNAc WGA से बंधता है, ManNAc नहीं, और GalNAc केवल कमजोर रूप से बंधता है। WGA गैल (1-4)GlcNAc (1-3) युक्त बड़े ऑलिगोसैकेराइड में आंतरिक GlcNAc अवशेषों से उच्च संबंध के साथ बंधता है। (यानी, पॉली (एमिनोलैक्टोज़)-प्रकार ग्लाइकन्स) दोहराता है। एन-एसिटाइलन्यूरैमिनिक एसिड भाग लेता है केवल WGA की कम-एफ़िनिटी इंटरैक्शन। डब्ल्यूजीए ग्लाइकेन विशिष्टता का एक जटिल पैटर्न दिखाता है जिसका उपयोग जटिल कार्बोहाइड्रेट के संरचनात्मक विश्लेषण के लिए किया जा सकता है। WGA का iFluor®488 प्रत्यय संभवतः सबसे चमकीला WGA प्रत्यय है। यह iFluor®488 डाई की चमकीली और हरी प्रतिदीप्ति प्रदर्शित करता है। iFluor®488 WGA प्रत्यय सियालिक एसिड और N-एसिटाइलग्लुकोसामिनिल अवशेषों से बंधता है, जैसा कि AF488 WGA कपलर करता है।

व्हीट जर्म एग्लूटीनिन (डब्ल्यूजीए) एक 36 केडीए लेक्टिन है जिसका उपयोग आमतौर पर स्तनधारी कोशिकाओं, ग्राम-पॉजिटिव बैक्टीरिया और यीस्ट की कोशिका झिल्लियों, साथ ही कंकाल और कार्डियक सेक्रल झिल्लियों को लेबल करने के लिए किया जाता है, क्योंकि इसमें एन-एसिटाइल के साथ युग्मन का गुण होता है। - -डी-ग्लूकोसामिनिल अवशेष और एन-एसिटाइल- -कोशिका झिल्लियों में डी-ग्लूकोसामिनिल ऑलिगोमर्स। जब डब्ल्यूजीए का उपयोग कार्डियोमायोसाइट धुंधलापन के लिए किया जाता है, तो कार्डियोमायोसाइट्स की कोशिका झिल्ली को दागदार किया जा सकता है ताकि वे हाइपरट्रॉफिक हों या नहीं, सामान्य समूह के साथ छवि की तुलना से देखा जा सके, और दाग वाली कोशिकाओं का व्यास और क्षेत्र भी देखा जा सके विशेष सॉफ्टवेयर से मापा जाएगा, जिससे यह विश्लेषण किया जा सकेगा कि कार्डियोमायोसाइट्स हाइपरट्रॉफिक हैं या नहीं।

 

 

गीली बर्फ के साथ जहाज; 12 महीने के लिए -20 डिग्री पर स्टोर करें।

 

 

अवयव	G1722-50यूएल
iF488-गेहूं रोगाणु एग्लूटीनिन (डब्ल्यूजीए, हरी बत्ती)	100 μL
नियमावली	1 पीसी

 

 

1. अपना खुद का तैयारी करें1×पीबीएस बफर(पीएच 7.2-7.4, अनुशंसितG4202), फिक्सेटिव युक्त 3.0-4.0% फॉर्मेल्डिहाइड (अनुशंसित)।जी1101, जिसमें 4% पीएफए ​​है),प्रतिदीप्ति शमन सीलर(अनुशंसित G1401), औरउपयोग के लिए तैयार डीएपीआई धुंधला समाधान(अनुशंसितG1012).

2. पहली बार उत्पाद का उपयोग करते समय, तरल ट्यूब की दीवार के नुकसान को रोकने के लिए पूरी तरह से पिघले उत्पाद को 1 मिनट के लिए कम गति पर सेंट्रीफ्यूज करें। अस्थिरता से विलायक के नुकसान को रोकने के लिए एक ही प्रयोग में उपयोग की गई मात्रा के अनुसार उत्पाद का वितरण करने की सिफारिश की जाती है। प्रकाश से -20 डिग्री दूर रखें।

3. औपचारिक प्रयोगों से पहले, 5 μL iF488-व्हीट जर्म एग्लूटीनिन (WGA,ग्रीनलाइट) एस्पिरेट करें और प्राप्त करने के लिए 1 mL पीबीएस के साथ मिलाएंiF488-WGA कार्यशील समाधान. विभिन्न प्रकार की कोशिकाओं के लिए धुंधला प्रभाव अलग-अलग हो सकता है, कृपया इष्टतम धुंधला कार्य एकाग्रता के लिए साहित्य देखें या पता लगाने के लिए पूर्व-परीक्षण करें।iF488-WGA कार्यशील समाधानउपयोग के लिए तैयार है, कमरे के तापमान पर संग्रहीत किया जाता है और प्रकाश से संरक्षित किया जाता है, और उसी दिन उपयोग किया जाता है।

 

 

जीवित कोशिका धुंधलापन (उदाहरण के तौर पर उदाहरण के तौर पर अच्छी तरह से प्लेट)

1. कोशिकाओं को 1×पीबीएस बफर से 2 बार धोएं।

2. कोशिकाओं के प्रत्येक कुएं में 100 μL iF{2}}WGA कार्यशील घोल डालें और प्रकाश से सुरक्षित 37 डिग्री पर 10-30 मिनट के लिए इनक्यूबेट करें। तरल वाष्पीकरण को रोकने के लिए सीलिंग का ध्यान रखें। इनक्यूबेशन सॉल्यूशन निकालें और हर बार 3-5 मिनट के लिए बफर सॉल्यूशन से 2-3 बार धोएं।

3. ऊष्मायन पूरा होने के बाद, कोशिकाओं को हर बार 5 मिनट के लिए 1 × पीबीएस बफर बफर के साथ तीन बार धोया गया।

4. परिणाम प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी या लेजर कन्फोकल माइक्रोस्कोपी द्वारा देखे गए।

 

फिक्स्ड सेल स्टेनिंग (उदाहरण के तौर पर वेल प्लेट सेल क्रॉलर)

1. संवर्धित कोशिकाओं को क्रॉल किया गया (कम से कम 50% संगम के घनत्व पर), संस्कृति माध्यम को हटा दिया गया, और कोशिकाओं को 37 डिग्री पर पूर्व-गर्म 1 × पीबीएस बफर के साथ दो बार धोया गया।

2. कोशिकाओं को कवर करने के लिए उचित मात्रा में फिक्सेटिव मिलाएं और कमरे के तापमान पर 10-30 मिनट तक फिक्स करें।

3. फिक्सेटिव को एस्पिरेट किया गया और कोशिकाओं को प्रत्येक 10 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर 1× पीबीएस बफर के साथ 2-3 बार धोया गया।

4. सेल क्रॉलर को थोड़ा हिलाकर सूखने के बाद, हिस्टोकेमिकल पेन से एक वृत्त बनाएं ताकि कोशिकाएं वृत्त के केंद्र में स्थित हों। कोशिकाओं को पूरी तरह से ढकने के लिए 100 μL iF{2}}WGA कार्यशील घोल लें और प्रकाश से 30 मिनट की दूरी पर 37 डिग्री पर इनक्यूबेट करें। सील करने में सावधानी बरतें और स्लाइडों को सुखाने के लिए तरल को वाष्पित होने से रोकें।

5. ऊष्मायन पूरा होने के बाद, कोशिकाओं को हर बार 5 मिनट के लिए 1 × पीबीएस बफर के साथ तीन बार धोया गया।

6. (वैकल्पिक) कोशिकाओं को कवर करने के लिए क्रॉलर स्लाइड्स में रेडी-टू-यूज़ डीएपीआई स्टेनिंग सॉल्यूशन की बूंदें डाली गईं, और 8 मिनट के लिए न्यूक्लियर स्टेनिंग की गई। कोशिकाओं को 1× पीबीएस बफर से 2-3 बार धोया गया हर बार 30 सेकंड-1 मिनट के लिए।

7. सेल क्रॉल को थोड़ा हिलाकर सुखाया गया और एंटी-फ्लोरेसेंस शमन सीलर की एक बूंद के साथ एक स्लाइड पर उलट दिया गया, और अतिरिक्त सीलर को एक कागज तौलिया के साथ हटा दिया गया।

[टिप्पणी]चरण 6 और 7 को डीएपीआई युक्त एंटी-फ्लोरेसेंस शमन सीलर (सिफारिश जी1407) से बदला जा सकता है, जो एक ही समय में नाभिक के धुंधलापन और फिल्म की सीलिंग को पूरा करता है।

8. परिणाम प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी या लेजर कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपी द्वारा चयनित 488 (Ex/Em=493/517 nm) और DAPI (Ex/Em{4}}/454 nm) चैनलों के साथ देखे गए।

 

ऊतक वर्गों का धुंधला होना

1. ऊतक सेक्शनिंग पूर्व-उपचार:

जमे हुए खंड (ताजा ऊतक जमे हुए खंड या स्थिर ऊतक जमे हुए खंड) को कई मिनट तक कमरे के तापमान पर खड़े रहने के लिए छोड़ दिया गया और कमरे के तापमान पर वापस आ गया; अनुभागों को कमरे के तापमान पर 10-15 मिनट के लिए फिक्सेटिव में डुबोया गया, हटा दिया गया और प्राकृतिक रूप से सुखाया गया, और फिर ऊतक पर अवशिष्ट फिक्सेटिव को हटाने के लिए शुद्ध पानी या 1 × पीबीएस बफर में गीला और धोया गया।

पैराफिन अनुभागों को डीवैक्स किया गया और पुनर्जलीकृत किया गया;

एंटीजन मरम्मत के लिए ऊतक अनुभाग (पैराफिन अनुभाग या स्थिर ऊतकों के जमे हुए अनुभाग) को माइक्रोवेव ओवन में EDTA एंटीजन मरम्मत बफर (पीएच 8. 0) से भरे मरम्मत कैसेट में रखा गया था। 8 मिनट के लिए मध्यम गर्मी, 8 मिनट के लिए संघर्ष विराम से लेकर 7 मिनट के लिए मध्यम-निम्न गर्मी, इस प्रक्रिया को बफर के अत्यधिक वाष्पीकरण को रोकना चाहिए, स्लाइडों को सूखा न करें। प्राकृतिक रूप से ठंडा होने के बाद, स्लाइडों को 1×पीबीएस बफर में रखा गया और रंग हटाने वाले शेकर पर 3 बार हिलाकर धोया गया, हर बार 5 मिनट के लिए।

2. धुंधलापन: ऊतक का भाग थोड़ा सूखने के बाद हिस्टोकेमिकल पेन से ऊतक के चारों ओर एक घेरा बनाएं। ऊतक को ढकने के लिए घेरे में 50-100 μL iF488-WGA कार्यशील घोल डालें और 30 मिनट के लिए प्रकाश से 37 डिग्री की दूरी पर इनक्यूबेट करें। तरल को वाष्पित होने और स्लाइडों को सूखने से रोकने के लिए सीलिंग का ध्यान रखें।

3. धोएं: ऊष्मायन पूरा होने के बाद, नमूनों को हर बार 5 मिनट के लिए 1 × पीबीएस बफर के साथ तीन बार धोया गया।

4. न्यूक्लियस स्टेनिंग (वैकल्पिक): कोशिकाओं को कवर करने के लिए नमूने में ड्रॉपवाइज रेडी-टू-यूज़ डीएपीआई स्टेनिंग सॉल्यूशन मिलाएं, और 8 मिनट के लिए न्यूक्लियस स्टेनिंग करें। सैंपल को 1×पीबीएस बफर के साथ 30 बार 2-3 बार धोएं। हर बार s-1 मिनट।

5. सीलिंग: अनुभागों को थोड़ा हिलाकर सूखने के बाद, नमूने में एंटी-फ्लोरेसेंस शमन सीलर की एक बूंद जोड़ें और इसे एक उपयुक्त कवरस्लिप के साथ सील करें।

[टिप्पणी]चरण 4 और 5 को डीएपीआई युक्त एंटी-फ्लोरेसेंस शमन सीलर (सिफारिश जी1407) से बदला जा सकता है, जो एक ही समय में नाभिक के धुंधलापन और फिल्म की सीलिंग को पूरा करता है।

6. माइक्रोस्कोपी: परिणामों का निरीक्षण करने के लिए प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी या लेजर कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपी, 488 (Ex/Em=493/517 nm) और DAPI (Ex/Em=364/454 nm) चैनलों का चयन करें।

 

 

1. जो नमूने लंबे समय से तय किए गए हैं (उदाहरण के लिए, पैराफिन अनुभाग) उन्हें पायरोलिसिस मरम्मत प्रक्रिया के अधीन किया जाना चाहिए अन्यथा सकारात्मक परिणाम कमजोर होंगे या न के बराबर होंगे।

2. मायोकार्डियल विश्लेषण के लिए डब्ल्यूजीए स्टेनिंग के लिए उच्च स्तर के मायोकार्डियल ऊतक की आवश्यकता होती है, जो पूर्ण और सजातीय होना चाहिए, और पैराफिन अनुभागों के नमूने प्रदान करना सबसे अच्छा है।

3. सेलुलर नमूनों के लिए, धुंधला होने से पहले पारगम्य समाधान के उपयोग से बचें, क्योंकि इससे साइटोप्लाज्मिक संरचनात्मक घटकों पर दाग लग सकता है।

4. फ्लोरोसेंट रंग बुझाने के अधीन हैं, और यह अनुशंसा की जाती है कि धुंधला होने के बाद परीक्षण और अवलोकन तस्वीरें जल्द से जल्द पूरी की जाएं।

5. कृपया ऑपरेशन के दौरान लैब कोट और दस्ताने पहनें।

 

केवल अनुसंधान उपयोग के लिए!

Ver. नहीं।:V1.0-202403

 

 

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