एक्सोसोम को अलग करने के लिए क्रोमैटोग्राफ़िक कॉलम (सेल सुपरनेटेंट)

 

प्रोडक्ट का नाम	बिल्ली। नहीं।	विशेष.
एक्सोसोम को अलग करने के लिए क्रोमैटोग्राफ़िक कॉलम (सेल सुपरनैटेंट)	G4113-5	5 टुकड़े

 

 

एक्सोसोम एक समान आकार और 30 - 150 एनएम के कण आकार वाले नैनोस्केल झिल्लीदार पुटिका होते हैं जो कोशिकाओं द्वारा बाह्य कोशिकीय स्थान में सक्रिय रूप से स्रावित होते हैं। इन पुटिकाओं के अपने विशिष्ट मार्कर होते हैं, और ये प्रोटीन, एमआरएनए, एमआईआरएनए, लिपिड और अन्य पदार्थों से लेपित होते हैं, जिनका उपयोग कोशिकाओं के बीच पदार्थ और सिग्नल संचार के लिए एक मार्ग के रूप में किया जा सकता है और कोशिका वृद्धि, कोशिका प्रसार जैसी प्रक्रियाओं में भाग ले सकते हैं। कोशिका विभेदन, कोशिका प्रवासन, एंजियोजेनेसिस और ट्यूमर वृद्धि।

यह उत्पाद एक आकार बहिष्करण क्रोमैटोग्राफी कॉलम (एसईसी) है जो सेल सतह पर तैरनेवाला से एक्सोसोम के तेजी से पृथक्करण और शुद्धिकरण के लिए उपयुक्त है। यह उत्पाद कोशिका सतह पर तैरनेवाला एक्सोसोम को अलग और समृद्ध करने के लिए एक सेल सतह पर तैरनेवाला एकाग्रता एजेंट का उपयोग करता है, और फिर केंद्रित एक्सोसोम को शुद्ध करने के लिए एक बाह्य कोशिकीय पुटिका पृथक्करण क्रोमैटोग्राफी कॉलम का उपयोग करता है। जो न केवल उच्च-शुद्धता और उच्च गतिविधि वाले एक्सोसोम को बरकरार रख सकता है, बल्कि प्रोटीन को भी कुशलतापूर्वक हटा सकता है; अल्ट्रा-हाई स्पीड सेंट्रीफ्यूजेशन विधि में अल्ट्रा-हाई सेंट्रीफ्यूगल बल के कारण बाह्य कोशिका झिल्ली संरचना को होने वाले नुकसान से प्रभावी ढंग से बचा जा सकता है, और पारंपरिक वर्षा विधियों में एक्सोसोम की शुद्धता पर उच्च एकाग्रता प्रोटीन और अन्य पदार्थों के प्रभाव को कम किया जा सकता है।

 

 

कमरे के तापमान पर परिवहन; 12 महीने की वैधता अवधि के साथ कमरे के तापमान पर स्टोर करें।

 

 

घटक संख्या	अवयव	G4113-5
G4113-1	एक्सोसोम को अलग करने के लिए क्रोमैटोग्राफ़िक कॉलम (सेल सुपरनैटेंट)	5 टुकड़े
G4113-2	सेल सतह पर तैरनेवाला ध्यान केंद्रित	250 एमएल
उत्पाद का मार्गदर्शन		1 पीसी

 

 

1. कोशिका सतह पर तैरनेवाला एकाग्रता

ए) सेल सतह पर तैरनेवाला के जैविक नमूनों को 0.22 μM फ़िल्टर झिल्ली द्वारा फ़िल्टर किया जाता है और उपयोग के लिए प्रारंभिक रूप से शुद्ध किया जाता है;

बी) सेल सुपरनैटेंट जैविक नमूना और सेल सुपरनैटेंट सांद्रण को समान मात्रा में मिलाएं, 15 सेकंड के लिए जोर से हिलाएं, और इसे 4 डिग्री पर रेफ्रिजरेटर में 2 घंटे तक खड़े रहने दें;

ग) मिश्रण को एक सेंट्रीफ्यूज में 4 डिग्री पर 10000 × g पर 60 मिनट के लिए रखें; सतह पर तैरनेवाला त्यागें;

डी) सेल सतह पर तैरनेवाला जैविक नमूने की 5% मात्रा का 1 × पीबीएस बफर पूरी तरह से पुनर्निलंबन अपकेंद्रित्र वर्षा में जोड़ा जाता है;

ई) भारी निलंबन एक्सोसोम से समृद्ध है, जिसका उपयोग बाद के प्रयोगों के लिए किया जा सकता है या बैकअप के लिए -80 डिग्री पर जमे हुए किया जा सकता है।

2. एक्सोसोम के शुद्धिकरण की तैयारी

ए) एक कमरे के तापमान, बाँझ बफर समाधान, जैसे पीबीएस (अनुशंसित जी4202) तैयार करें;

बी) कमरे के तापमान, बाँझ 0.1M NaOH अभिकर्मक और 20% इथेनॉल तैयार करें;

ग) सेपरेशन कॉलम का उपयोग करने से पहले, सेपरेशन कॉलम के लाल ऊपरी कवर को हटा दें और इसे उपयोग के लिए ब्रैकेट (अनुशंसित G6063) पर रखें;

3. एक्सोसोम पृथक्करण

ए) बाद में उपयोग के लिए सेल सतह पर तैरनेवाला ध्यान केंद्रित करने और पुन: निलंबित करने के बाद एक्सोसोम नमूने तैयार करें;

बी) पृथक्करण कॉलम के सफेद निचले कवर को हटा दें, और कॉलम के अंदर सुरक्षात्मक तरल बाहर निकलने के बाद, पृथक्करण कॉलम को साफ करने के लिए बैचों में कुल 30 एमएल बफर समाधान जोड़ें;

ग) छलनी प्लेट के ऊपर सभी बफर पृथक्करण स्तंभ में प्रवेश करने के बाद; चरण 3.ए से अतिरिक्त एक्सोसोम नमूने का {0}}.5एमएल लें और इसे छलनी प्लेट के केंद्र में जोड़ें (यदि 0.5एमएल से कम है, तो बनाने के लिए बफर समाधान जोड़ें 0.5mL तक);

घ) सभी एक्सोसोम नमूने छलनी प्लेट से गुजरने और पृथक्करण कॉलम में प्रवेश करने के बाद, 2.5 एमएल बफर समाधान जोड़ें;

ई) पिछले चरण में सभी बफर समाधान छलनी प्लेट से गुजरने और पृथक्करण कॉलम में प्रवेश करने के बाद, 1 एमएल बफर समाधान जोड़ें, और साथ ही 1 एमएल वाशआउट समाधान इकट्ठा करें, जो स्वाभाविक रूप से सक्रिय एक्सोसोम में समृद्ध है; इसे बाद के प्रयोगों के लिए लागू किया जा सकता है या बैकअप के लिए -80 डिग्री पर फ़्रीज़ किया जा सकता है;

4. पृथक्करण के बाद उपचार

ए) एक्सोसोम का पृथक्करण पूरा करने के बाद, पृथक्करण कॉलम को साफ करने के लिए बैचों में कुल 30 एमएल बफर समाधान जोड़ें;

बी) यदि कोशिका सतह पर तैरनेवाला से एक्सोसोम को अलग करने के लिए पृथक्करण कॉलम का उपयोग जारी रखना आवश्यक है, तो चरण 3.सी) से 3.ई तक दोहराएं);

ग) यदि कोशिका सतह पर तैरनेवाला से एक्सोसोम को अलग करने के लिए पृथक्करण स्तंभ का उपयोग जारी रखना आवश्यक नहीं है, तो पृथक्करण स्तंभ को साफ करने के लिए पहले 5 एमएल 0.1M NaOH जोड़ें, फिर कुल 20 एमएल बफर समाधान जोड़ें पृथक्करण स्तंभ को साफ करने और संतुलित करने के लिए बैचों में, और फिर पृथक्करण स्तंभ को साफ करने के लिए 20% इथेनॉल के 5 एमएल जोड़ें। सफाई के बाद, पृथक्करण स्तंभ के सफेद निचले कवर को ढक दें; अंत में, पृथक्करण स्तंभ के लाल शीर्ष को मॉइस्चराइज़ करने, ढकने और कसने के लिए 20% इथेनॉल का 2mL जोड़ें, और पृथक्करण स्तंभ को कमरे के तापमान पर संग्रहीत करें।

 

 

1. इस उत्पाद का उपयोग करके विभिन्न सेल सतह पर तैरनेवाला से एक्सोसोम को अलग करते समय, निक्षालन वक्र और शुद्धता थोड़ी भिन्न होती है, लेकिन यह समग्र प्रवृत्ति को प्रभावित नहीं करती है।

2. इस उत्पाद से सेल सतह पर तैरनेवाला एक्सोसोम को अलग करने की प्रक्रिया के दौरान, पृथक्करण कॉलम में तरल प्रवाह के लंबे समय तक रुकावट से बचना आवश्यक है।

3. इस उत्पाद के उपयोग के दौरान, विभिन्न स्रोतों से प्राप्त जैविक नमूनों को एक ही कॉलम पर अलग न करें, और एक ही कॉलम का 5 बार से अधिक पुन: उपयोग न करें।

4. यह उत्पाद कमरे के तापमान पर भंडारण और उपयोग के लिए उपयुक्त है, और कम तापमान के उपयोग और उच्च तापमान हीटिंग से बचना चाहिए।

5. प्रयोग के दौरान, संदूषण से बचने और सुरक्षा सुनिश्चित करने के लिए कृपया प्रयोगशाला के कपड़े और डिस्पोजेबल दस्ताने पहनें।

 

केवल अनुसंधान उपयोग के लिए!

 

 

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