एक्सोसोम (सेल सुपरनैटेन्ट) को अलग करने के लिए क्रोमैटोग्राफ़िक कॉलम

एक्सोसोम स्वाभाविक रूप से रक्त, लार, मूत्र और स्तन के दूध जैसे शरीर के तरल पदार्थों में मौजूद होते हैं। वे समान आकार और 30 से 150 एनएम के कण आकार वाले नैनोस्केल झिल्लीदार पुटिकाएं हैं जो कोशिकाओं द्वारा बाह्य अंतरिक्ष में सक्रिय रूप से स्रावित होते हैं। इस पुटिका के अपने विशिष्ट मार्कर होते हैं, और यह प्रोटीन, एमआरएनए, एमआईआरएनए, लिपिड और अन्य पदार्थों से लेपित होता है, जिसका उपयोग कोशिकाओं के बीच पदार्थ और सिग्नल संचार के लिए एक मार्ग के रूप में किया जा सकता है और कोशिका वृद्धि, कोशिका प्रसार, कोशिका की प्रक्रियाओं में भाग ले सकता है। विभेदन, कोशिका प्रवासन, एंजियोजेनेसिस और ट्यूमर वृद्धि।

यह उत्पाद एक आकार बहिष्करण क्रोमैटोग्राफी कॉलम (एसईसी) है जो सीरम/प्लाज्मा एक्सोसोम के तेजी से पृथक्करण और शुद्धिकरण के लिए उपयुक्त है। यह प्रोटीन को कुशलतापूर्वक हटाते हुए उच्च शुद्धता और अत्यधिक प्राकृतिक रूप से सक्रिय एक्सोसोम को बनाए रख सकता है; पारंपरिक अल्ट्रासेंट्रीफ्यूजेशन विधियों में अल्ट्रा-उच्च केन्द्रापसारक बल के कारण बाह्य कोशिका झिल्ली संरचना को होने वाले नुकसान से प्रभावी ढंग से बचा जा सकता है, जबकि पारंपरिक वर्षा विधियों में एक्सोसोम की शुद्धता पर उच्च सांद्रता प्रोटीन और अन्य पदार्थों के प्रभाव को कम किया जा सकता है।

कमरे के तापमान पर परिवहन; 12 महीने की वैधता अवधि के साथ कमरे के तापमान पर स्टोर करें।

1. तैयारी

ए) एक कमरे के तापमान, बाँझ बफर समाधान, जैसे पीबीएस (अनुशंसित जी4202) तैयार करें;

बी) कमरे के तापमान, बाँझ 0.1M NaOH अभिकर्मक और 20% इथेनॉल तैयार करें;

ग) सेपरेशन कॉलम का उपयोग करने से पहले, सेपरेशन कॉलम के लाल ऊपरी कवर को हटा दें और इसे उपयोग के लिए ब्रैकेट (अनुशंसित G6063) पर रखें;

2. एक्सोसोम पृथक्करण

ए) सीरम/प्लाज्मा जैविक नमूनों का उपयोग करना 0.22 μm झिल्ली निस्पंदन, बैकअप के लिए प्रारंभिक शुद्धिकरण;

बी) पृथक्करण स्तंभ के सफेद निचले कवर को हटा दें, और स्तंभ के अंदर सुरक्षात्मक तरल बाहर निकलने के बाद, पृथक्करण स्तंभ को साफ करने के लिए बैचों में कुल 30 एमएल बफर समाधान तरल जोड़ें;

ग) छलनी प्लेट के ऊपर सभी बफर पृथक्करण स्तंभ में प्रवेश करने के बाद; चरण 2.ए से बैकअप सीरम/प्लाज्मा का {0}}.5 एमएल लें और इसे छलनी प्लेट के केंद्र में जोड़ें (यदि {{5%).5 एमएल से कम है, तो बफर समाधान जोड़ें 0.5mL तक बनाएं);

घ) सभी सीरम/प्लाज्मा छलनी प्लेट से गुजरने और पृथक्करण कॉलम में प्रवेश करने के बाद, 2.5 एमएल बफर समाधान जोड़ें;

ई) पिछले चरण में सभी बफर समाधान छलनी प्लेट से गुजरने और पृथक्करण कॉलम में प्रवेश करने के बाद, 1 एमएल बफर समाधान जोड़ें। साथ ही, 1 एमएल वॉशआउट सॉल्यूशन इकट्ठा करें, जो प्राकृतिक रूप से सक्रिय एक्सोसोम से समृद्ध है और इसे बाद के प्रयोगों के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है या बैकअप के लिए -80 डिग्री पर जमाया जा सकता है;

3. पृथक्करण के बाद उपचार

ए) एक्सोसोम का पृथक्करण पूरा करने के बाद, पृथक्करण कॉलम को साफ करने के लिए बैचों में कुल 30 एमएल बफर समाधान जोड़ें;

बी) यदि सीरम/प्लाज्मा एक्सोसोम को अलग करने के लिए पृथक्करण कॉलम का उपयोग जारी रखना आवश्यक है, तो चरण 2.सी) से 2.ई तक दोहराएं);

ग) यदि सीरम/प्लाज्मा एक्सोसोम को अलग करने के लिए पृथक्करण कॉलम का उपयोग जारी रखना आवश्यक नहीं है, तो पृथक्करण कॉलम को साफ करने के लिए पहले 5 एमएल 0.1M NaOH मिलाएं, फिर इसमें कुल 20 एमएल बफर सॉल्यूशन डालें। पृथक्करण स्तंभ को साफ करने और संतुलित करने के लिए बैच, और फिर पृथक्करण स्तंभ को साफ करने के लिए 20% इथेनॉल के 5 एमएल जोड़ें। सफाई के बाद, पृथक्करण स्तंभ के सफेद निचले कवर को ढक दें; अंत में, पृथक्करण स्तंभ के लाल शीर्ष को मॉइस्चराइज़ करने, ढकने और कसने के लिए 20% इथेनॉल का 2mL जोड़ें, और पृथक्करण स्तंभ को कमरे के तापमान पर संग्रहीत करें।

1. विभिन्न सीरम/प्लाज्मा से एक्सोसोम को अलग करते समय, इस उत्पाद का निक्षालन वक्र और शुद्धता थोड़ी भिन्न हो सकती है, लेकिन यह समग्र प्रवृत्ति को प्रभावित नहीं करती है।

2. जब नमूने का आकार बड़ा होता है या नमूने में एक्सोसोम की सामग्री कम होती है, तो नमूने को पहले केंद्रित किया जा सकता है और फिर पृथक्करण क्रोमैटोग्राफी कॉलम का उपयोग करके अलग किया जा सकता है।

3. इस उत्पाद से सीरम/प्लाज्मा एक्सोसोम को अलग करने की प्रक्रिया के दौरान, पृथक्करण कॉलम में तरल प्रवाह के लंबे समय तक रुकावट से बचना आवश्यक है।

4. इस उत्पाद के उपयोग के दौरान, विभिन्न स्रोतों से जैविक नमूनों को एक ही कॉलम पर अलग न करें, और एक ही कॉलम का 5 बार से अधिक पुन: उपयोग न करें।

5. यह उत्पाद कमरे के तापमान पर भंडारण और उपयोग के लिए उपयुक्त है, और कम तापमान के उपयोग और उच्च तापमान हीटिंग से बचना चाहिए।

6. प्रयोग के दौरान, संदूषण से बचने और सुरक्षा सुनिश्चित करने के लिए कृपया प्रयोगशाला के कपड़े और डिस्पोजेबल दस्ताने पहनें।

केवल अनुसंधान उपयोग के लिए!

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