मोनो-लुमी जुगनू लूसिफ़ेरेज़ रिपोर्टर जीन परख किट

 

प्रोडक्ट का नाम	बिल्ली। नहीं।	विशेष.
मोनो-लुमी जुगनू लूसिफ़ेरेज़ रिपोर्टर जीन परख किट	G1702-100T	100T

 

 

जुगनू-ल्यूसिफ़ेरेज़ प्रणाली का उपयोग अधिकतर रिपोर्टर जीन का पता लगाने के लिए किया जाता है। एक रिपोर्टर जीन प्लास्मिड का निर्माण करने के लिए लक्ष्य जीन के ट्रांसक्रिप्शनल नियामक तत्वों को ल्यूसिफेरेज के अपस्ट्रीम और डाउनस्ट्रीम में क्लोन किया गया था। फिर प्लास्मिड को कोशिकाओं में ट्रांसफ़ेक्ट किया गया, और ट्रांसफ़ेक्ट कोशिकाओं को दवाओं या अन्य उत्तेजनाओं के साथ इलाज करने के बाद, कोशिकाओं को एकत्र किया गया और लाइज़ किया गया, और लाइसेट में ल्यूसिफ़रेज़ गतिविधि को मापा गया। दवाओं जैसे बहिर्जात उत्तेजनाओं द्वारा लक्ष्य जीन का ट्रांसक्रिप्शनल विनियमन लूसिफ़ेरेज़ गतिविधि द्वारा निर्धारित किया जाता है।

मोनो-लुमी फ़ायरफ़्लाई लूसिफ़ेरेज़ रिपोर्टर जीन परख किट में उच्च संवेदनशीलता, व्यापक पहचान सीमा और स्थिर प्रतिदीप्ति संकेत है। जुगनू लूसिफ़ेरेज़ का उपयोग करना, जो एमजी 2+, एटीपी, ओ2, आदि की स्थितियों के तहत ऑक्सील्यूसिफ़ेरिन उत्पन्न करने के लिए जुगनू लूसिफ़ेरिन सब्सट्रेट (ल्यूसिफ़ेरिन) के ऑक्सीकरण को उत्प्रेरित करता है और इस प्रक्रिया में बायोफ्लोरेसेंस उत्पन्न करता है, जुगनू लूसिफ़ेरेज़ गतिविधि का सिद्धांत हो सकता है तेजी से पता चला.

 

 

सूखी बर्फ के साथ जहाज; प्रकाश से सुरक्षित -80 डिग्री पर स्टोर, कम से कम एक वर्ष के लिए वैध; 6 महीने तक प्रकाश से सुरक्षित -20 डिग्री पर स्टोर करें।

 

 

घटक संख्या	अवयव	G1702-100T
G1702-1	सेल लिसिस बफर	50 एमएल
G1702-2	लूसिफ़ेरेज़ प्रतिक्रिया सब्सट्रेट (50×)	200 μL
G1702-3	लूसिफ़ेरेज़ प्रतिक्रिया बफ़र	10 एमएल
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1. 1× जुगनू लूसिफ़ेरेज़ प्रतिक्रिया कार्य समाधान की तैयारी

1.1 किट के प्रत्येक घटक को कमरे के तापमान पर पिघलाएं और पूर्ण विघटन सुनिश्चित करने के लिए उल्टा मिलाएं। लूसिफ़ेरेज़ रिएक्शन सबस्ट्रेट (50×) को बर्फ पर पिघलाया जाना चाहिए और संक्षेप में सेंट्रीफ्यूज किया जाना चाहिए ताकि यह सुनिश्चित हो सके कि अभिकर्मक ट्यूब के नीचे तक डूब जाए;

1.2 लूसिफ़ेरेज़ रिएक्शन सबस्ट्रेट (50×) को लूसिफ़ेरेज़ रिएक्शन बफर के साथ 50 बार पतला किया गया था, यानी, 10 μL लूसिफ़ेरेज़ रिएक्शन सब्सट्रेट (50×) + 490 μL लूसिफ़ेरेज़ रिएक्शन बफर को 500 μL 1× जुगनू लूसिफ़ेरेज़ प्राप्त करने के लिए अच्छी तरह मिलाया गया था। प्रतिक्रिया बफ़र.

2. कोशिका पूर्व उपचार और लसीका

2.1 प्लेट कोशिकाएं/उपयुक्त वेल प्लेटों में प्रयोगात्मक आवश्यकता के अनुसार सेल अभिकर्मक या अन्य प्रासंगिक प्रीट्रीटमेंट करें।

2.2 अनुबद्ध कोशिकाओं के लिए: मूल कोशिका संवर्धन माध्यम को हटाने के बाद, नीचे दी गई तालिका के अनुसार प्रत्येक कुएं में उचित मात्रा में सेल लिसिस बफर जोड़ें।

निलंबन कोशिकाओं के लिए: अपकेंद्रित्र के बाद, सतह पर तैरनेवाला हटा दें और अवक्षेपित कोशिकाओं में उचित मात्रा में सेल लिसिस बफर जोड़ें

सुझाई गई लाइसिस बफ़र की मात्रा के लिए नीचे दी गई तालिका देखें।

 

सेल कल्चर वेल-प्लेट	सेल लिसिस बफर/खैर
6-ठीक है	500 μL
12-ठीक है	300 μL
24-ठीक है	200 μL
48-ठीक है	150 μL
96-ठीक है	100 μL

 

2.3 लाइसिस कोशिकाएं पूरी तरह से कमरे के तापमान पर 10-20 मिनट के लिए, कोशिकाओं को 1.5 एमएल सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में 12,{6}} ×जी पर सेंट्रीफ्यूज द्वारा 10 मिनट के लिए 4 डिग्री पर एकत्रित करें, सतह पर तैरनेवाला (सेल लाइसेट) रखें बाद में उपयोग करें.

3. जुगनू लूसिफ़ेरेज़ परख

3.1 पहले से तैयार 1× जुगनू लूसिफ़ेरेज़ प्रतिक्रिया कार्यशील समाधान को कमरे के तापमान पर संतुलित किया गया और 100 μL/वेल पर एक अपारदर्शी सफेद 96-वेल प्लेट में जोड़ा गया;

3.2 चरण 2 से सेल लाइसिस सतह पर तैरनेवाला 20 μL/वेल पर उपरोक्त 96-वेल प्लेट में जोड़ा गया था;

3.3 एकरूपता के लिए क्षैतिज रूप से हिलाएं और तुरंत एक ल्यूमिनोमीटर ल्यूमिनसेंस मीटर, एक केमिल्यूमिनसेंस डिटेक्शन मॉड्यूल के साथ एक बहुक्रियाशील एंजाइम लेबलर, या बायोल्यूमिनसेंस का पता लगाने में सक्षम अन्य उपकरण का उपयोग करके एक केमिल्यूमिनसेंस परख करें।

 

 

1. परख से पहले, पहले से तैयार 1× जुगनू लूसिफ़ेरेज़ रिएक्शन वर्क सॉल्यूशन को उपयोग से पहले कमरे के तापमान पर वापस लाया जाना चाहिए।

2. लूसिफ़ेरेज़ रिएक्शन बफ़र पिघलने के बाद अवक्षेपित हो सकता है। पूर्ण विघटन सुनिश्चित करने के लिए कृपया उपयोग से पहले अच्छी तरह हिलाएं।

3. 1× लूसिफ़ेरेज़ प्रतिक्रिया कार्यशील समाधान ऑक्सीकरण होने का खतरा है। मल्टी-सैंपल डिटेक्शन के लिए, 1× जुगनू लूसिफ़ेरेज़ प्रतिक्रिया कार्यशील समाधान को जोड़ने को कम समय में नियंत्रित किया जाना चाहिए। मल्टीचैनल पिपेट के साथ नमूने जोड़ने और प्रत्येक कुएं की मात्रा को सुसंगत रखने की सिफारिश की जाती है।

4. कुओं के बीच हस्तक्षेप को रोकने के लिए, एक सफेद, अपारदर्शी कुआं प्लेट का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है। काली, अपारदर्शी वेल प्लेट का भी उपयोग किया जा सकता है, लेकिन यह प्रतिदीप्ति संकेत को अवशोषित कर लेगा, जिससे पता लगाने के प्रतिदीप्ति संकेत कम हो जाएंगे।

5. अपनी सुरक्षा और स्वास्थ्य के लिए कृपया सुरक्षा चश्मा, दस्ताने या सुरक्षात्मक कपड़े पहनें।

 

केवल अनुसंधान उपयोग के लिए!

 

 

 

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