होचस्ट 33258 स्टेनिंग सॉल्यूशन (उपयोग के लिए तैयार)

Hoechst 33258 का आणविक सूत्र C25H24N6O·3HCl है, आणविक भार 533.88 है, और CAS संख्या 23491-45-4 है। होचस्ट 33258 एक नीली फ्लोरोसेंट डाई है जो कोशिका झिल्ली में प्रवेश कर सकती है, और डबल-स्ट्रैंडेड डीएनए के साथ संयुक्त होने पर इसकी फ्लोरोसेंस काफी बढ़ जाती है। अधिकतम उत्तेजना तरंगदैर्ध्य 346 एनएम है, और अधिकतम उत्सर्जन तरंगदैर्घ्य 460 एनएम है। होचस्ट 33258 का उपयोग आमतौर पर एपोप्टोसिस का पता लगाने, परमाणु धुंधलापन, या नियमित डीएनए धुंधलापन के लिए किया जाता है। इसका उपयोग स्थिर कोशिकाओं और ऊतकों या गैर-स्थिर कोशिकाओं और ऊतकों के नाभिक को दागने के लिए किया जा सकता है। धुंधला होने के बाद, इसे प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप द्वारा देखा जा सकता है या फ्लो साइटोमेट्री द्वारा पता लगाया जा सकता है। जब प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी द्वारा देखा जाता है, तो यह पराबैंगनी प्रकाश, जो नीली प्रतिदीप्ति है, से उत्तेजित होता है।

यह उत्पाद उपयोग के लिए तैयार समाधान है, जिसकी सांद्रता सभी प्रकार की नियमित धुंधलापन की जरूरतों को पूरा करने के लिए अनुकूलित है।

गीली बर्फ परिवहन; प्रकाश से 2-8 डिग्री दूर स्टोर करें, 6 महीने के लिए वैध।

1. स्थिर कोशिका या ऊतक अनुभागों के लिए:

एक। स्थिर कोशिका या ऊतक के नमूनों के लिए, निर्धारण के बाद फिक्सिंग समाधान को हटा दें, और पीबीएस या अन्य उपयुक्त बफर से 2-3 बार, 3-5 हर बार धोएं (निलंबित कोशिकाओं का पता लगाने के लिए, कृपया दिनचर्या का पालन करें) निलंबित कोशिकाओं की संचालन विधि, और सेंट्रीफ्यूजेशन और अन्य चरण सभी प्रयोगों में जोड़े जाएंगे);

बी। (वैकल्पिक चरण) यदि स्थिर कोशिकाओं या ऊतकों को इम्यूनोफ्लोरेसेंस स्टेनिंग से उपचारित करने की आवश्यकता है, तो संबंधित उपचार पहले किया जाना चाहिए, और फिर उपचार के बाद होचस्ट 33258 स्टेनिंग किया जाना चाहिए;

सी। नमूने को कवर करने के लिए सीधे उत्पाद होचस्ट 33258 डाई सॉल्यूशन (रेडीयूज़ प्रकार) की उचित मात्रा लें, और कमरे के तापमान पर लगभग 5 मिनट तक अंधेरे में रखें;

डी। डाई का घोल निकालें और इसे पीबीएस या अन्य उपयुक्त बफर से 2-3 बार, हर बार 3-5 मिनट तक धोएं;

ई. प्लेटों को सील करने के बाद या सीधे एक प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप के नीचे रखने के बाद, उत्तेजना तरंग दैर्ध्य 350 एनएम था, और उत्सर्जन तरंग दैर्ध्य 460 एनएम था।

2. जीवित कोशिकाओं या सुसंस्कृत ऊतकों के लिए:

एक। दागे जाने वाले नमूने को पूरी तरह से ढकने के लिए सेल कल्चर में उचित मात्रा में होचस्ट 33258 डाई सॉल्यूशन (उपयोग के लिए तैयार प्रकार) मिलाएं; आम तौर पर, एक 6-वेल प्लेट के वेल में 1 एमएल स्टेनिंग सॉल्यूशन मिलाया जाना चाहिए, और एक 96- वेल प्लेट के वेल में 100 μL स्टेनिंग सॉल्यूशन मिलाया जाना चाहिए। नमूनों को 37 डिग्री पर एक इनक्यूबेटर में 10-20 मिनट के लिए इनक्यूबेट किया गया था।

बी। डाई का घोल निकालें और इसे पीबीएस या अन्य उपयुक्त बफर से 2-3 बार, हर बार 3-5 मिनट तक धोएं;

सी। प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप के तहत सीधे देखा गया, उत्तेजना तरंग दैर्ध्य 350 एनएम था, और उत्सर्जन तरंग दैर्ध्य 460 एनएम था।

टिप्पणी:

1. सभी फ्लोरोसेंट रंगों में फ्लोरोसेंस शमन की समस्या होती है। रंगाई के बाद जितनी जल्दी हो सके फ़ोटो लेने की अनुशंसा की जाती है। प्रतिदीप्ति शमन को धीमा करने के लिए, एक प्रतिदीप्ति शमन सीलर (जी1401 अनुशंसित) का उपयोग किया जा सकता है।

2. ऑपरेशन के दौरान लैब कोट और डिस्पोजेबल दस्ताने पहनें।

केवल अनुसंधान उपयोग के लिए!

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