कैल्सिन-एएम/पीआई लिविंग/डेड सेल डबल स्टेनिंग किट

 

प्रोडक्ट का नाम	बिल्ली। नहीं।	विशेष.
कैल्सिन-एएम/पीआई लिविंग/डेड सेल डबल स्टेनिंग किट	G 1707-100T	100T

 

 

कैल्सिन एएम कैल्सिन (कैल्सिन एसिटोक्सिमिथाइल एस्टर) पर आधारित है और एक एसिटाइलमेथोक्सीमिथाइल एस्टर (एएम) समूह का परिचय देता है, जो न केवल कैल्सिन के आणविक हिस्से को छुपाता है जो कैल्शियम को बढ़ाता है, बल्कि इसकी हाइड्रोफोबिसिटी को भी बढ़ाता है, जिससे कैल्सिन एएम को आसानी से झिल्ली में प्रवेश करने की अनुमति मिलती है। जीवित कोशिकाएँ. जब कैल्सीन एएम कोशिका में प्रवेश करता है, तो यह अंतर्जात सेलुलर एस्टरेज़ द्वारा कैल्सीन में परिवर्तित होने में सक्षम होता है। एएम समूह के नुकसान के साथ, कैल्सिन आसानी से कोशिका झिल्ली से नहीं गुजर सकता है और इस प्रकार कोशिका के अंदर ही बना रहता है; इसके अलावा, केलेटेड कैल्शियम का आणविक भाग आंशिक रूप से उजागर होता है और इंट्रासेल्युलर कैल्शियम आयनों से बंधे होने पर कैल्सिन जांच एक मजबूत हरे रंग की प्रतिदीप्ति उत्सर्जित करने में सक्षम होती है। मृत कोशिकाओं में एस्टरेज़ की कमी होती है, जो कैल्सिन एएम को कैल्सिन में हाइड्रोलाइज़ नहीं कर सकता है, और इसलिए इसे लेबल नहीं किया जा सकता है। पीआई (प्रोपीडियम आयोडाइड) लाल प्रतिदीप्ति उत्पन्न करने के लिए सेलुलर डीएनए डबल हेलिक्स में खुद को एम्बेड करने में सक्षम है, लेकिन यह सीधे जीवित कोशिका झिल्ली को दाग नहीं सकता है कोशिकाएं, और केवल मृत कोशिकाओं पर दाग लगा सकती हैं जहां कोशिका झिल्ली बाधित हो गई है। इस प्रकार कैल्सिन-एएम को पीआई के साथ मिलाने से जीवित और मृत दोनों कोशिकाओं की स्टेनिंग लेबलिंग की अनुमति मिलती है।

यह किट उपरोक्त सिद्धांतों पर आधारित है और हमारी कंपनी द्वारा जीवित कोशिकाओं की कैल्सिन-एएम लेबलिंग और मृत कोशिकाओं की पीआई लेबलिंग द्वारा डबल स्टेनिंग लेबलिंग करने के लिए अनुकूलित और डिबग किया गया है, जिससे जीवित और मृत कोशिका दोनों स्तरों के विश्लेषण की अनुमति मिलती है।

 

 

गीली बर्फ के साथ जहाज; प्रकाश से -20 डिग्री दूर स्टोर करें, 12 महीने के लिए वैध।

 

 

घटक संख्या	अवयव	G 1707-100T
G1707-1	कैल्सिन-एएम समाधान	20 μL
G1707-2	पीआई समाधान	20 μL
G1707-3	डिटेक्शन बफ़र	10 एमएल
नियमावली		कॉपी पर

नोट: उपरोक्त प्रतिक्रिया समय एकल 100 μL सिस्टम डिटेक्शन है।

 

 

1. कैल्सिन एएम/पीआई कार्यशील समाधान तैयार करना

ए) फ्रीजर से कैल्सिन-एएम सॉल्यूशन, पीआई सॉल्यूशन और डिटेक्शन बफर निकालें, फिर उन्हें कमरे के तापमान तक गर्म होने दें।

बी) आवश्यकता के अनुसार कार्यशील समाधान को कॉन्फ़िगर करें, कॉन्फ़िगरेशन सिस्टम निम्न तालिका को देख सकता है, ध्यान दें कि विभिन्न कोशिकाओं में अलग-अलग विशेषताएं हैं, प्रयोग की गई जांच एकाग्रता की वास्तविक स्थिति के अनुसार प्रयोग को जोड़ा या घटाया जा सकता है, अधिकांश 1:500-2000 के बीच सेल तनुकरण अनुपात;

 

	10 नमूने	50 नमूने	100 नमूने
कैल्सिन-एएम समाधान	2 μL	10 μL	20 μL
पीआई समाधान	2 μL	10 μL	20 μL
डिटेक्शन बफ़र	1 एमएल	5 एमएल	10 एमएल

 

2. सेल स्टेनिंग मार्कर:

क) प्रयोगात्मक आवश्यकता के अनुसार, कोशिकाओं का औषधियों या अन्य उत्तेजनाओं से उपचार करें;

बी) अनुवर्ती कोशिकाओं के लिए, पहले सतह पर तैरनेवाला इकट्ठा करें, ट्रिप्सिन द्वारा शेष अनुवर्ती कोशिकाओं को पचाएं और सभी कोशिकाओं को अच्छी तरह से मिलाएं। निलंबित कोशिकाओं के लिए, सभी कोशिकाओं को सीधे एकत्रित करें।

ग) एकत्रित कोशिकाओं को 3-5 मिनट के लिए 800-1, 000 आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज करें, सतह पर तैरनेवाला हटा दें, और हटाने के लिए कोशिकाओं को पीबीएस या अन्य बफर के साथ 2-3 बार अच्छी तरह से धो लें। अवशिष्ट एस्टरेज़ गतिविधि;

घ) ऊपर प्राप्त सेल पेलेट में कैल्सीन एएम/पीआई डिटेक्शन वर्किंग सॉल्यूशन मिलाएं और कोशिकाओं को धीरे और अच्छी तरह से फिर से निलंबित करें। हम 1×105~1×106 /एमएल पर सेल घनत्व को नियंत्रित करने के लिए कोशिकाओं को फिर से निलंबित करने के लिए कैल्सिन एएम/पीआई डिटेक्शन वर्किंग समाधान की सलाह देते हैं।

ई) अंधेरे में 15-30 मिनट के लिए 37ºC पर इनक्यूबेट करें।

3. कोशिका धुंधला अवलोकन:

ए) प्रायोगिक आवश्यकताओं के अनुसार, जीवित कोशिकाओं और मृत कोशिकाओं के स्तर का निरीक्षण और विश्लेषण करने के लिए प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप, फ्लो साइटोमेट्री, माइक्रोप्लेट रीडर और अन्य उपकरणों का उपयोग किया जा सकता है;

बी) कैल्सिन-एएम द्वारा लेबल की गई जीवित कोशिकाएं हरी फ्लोरोसेंट हैं, जिनमें ईएक्स/ईएम=494/517 एनएम है; पीआई की लेबल वाली मृत कोशिकाएं लाल प्रतिदीप्ति, ईएक्स/ईएम=535/617 एनएम हैं।

 

 

1. अलग-अलग सेल-टू-सेल गुणों और अलग-अलग पता लगाने के तरीकों के कारण, चरण में वर्णित जांच एकाग्रता और ऊष्मायन समय सीमा केवल संदर्भ के लिए है और इसे विशिष्ट स्थिति के अनुसार समायोजित किया जा सकता है।

2. सभी रंगों में शमन की समस्या होती है, कृपया प्रतिदीप्ति के शमन को धीमा करने के लिए फ्लोरोसेंट रंगों या दाग वाले नमूनों को संभालते समय प्रकाश से दूर रहें।

3. कैल्सिन-एएम आर्द्रता के प्रति बहुत संवेदनशील है, कृपया पहली बार उपयोग करते समय प्रयोगात्मक व्यवस्था के अनुसार उचित रूप से वितरित करें। कैल्सीन एएम/पीआई परख कार्यशील समाधान अभी वितरित और उपयोग किया जाना चाहिए।

4. अपने स्वास्थ्य और सुरक्षा के लिए कृपया सुरक्षा चश्मा, दस्ताने या सुरक्षात्मक कपड़े पहनें।

 

केवल अनुसंधान उपयोग के लिए!

 

 

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