प्रोटीन मुक्त रैपिड ब्लॉकिंग बफर

 

प्रोडक्ट का नाम	बिल्ली। नहीं।	विशेष.
प्रोटीन मुक्त रैपिड ब्लॉकिंग बफर	जी2052-500एमएल	500 एमएल

 

 

यह उत्पाद प्रोटीन-मुक्त फास्ट ब्लॉकिंग समाधान की एक नई पीढ़ी है, जो विभिन्न पॉलिमर का मिश्रण है। जो ठोस समर्थन की सतह पर अंतराल को जल्दी से भर सकता है और गैर-विशिष्ट संकेतों के हस्तक्षेप को कम कर सकता है; समग्र अवरोधन प्रभाव स्पष्ट रूप से बीएसए (गोजातीय सीरम एल्ब्यूमिन), स्किम्ड मिल्क पाउडर, कैसिइन, आदि पर आधारित पारंपरिक अवरोधन समाधान से बेहतर है; इसका उपयोग वेस्टर्न ब्लॉट (डब्ल्यूबी), एलिसा, आईएचसी, आईएफ और अन्य प्रयोगों में अवरोधन और प्राथमिक एंटीबॉडी कमजोर पड़ने के लिए किया जा सकता है।

तेज़ और कुशल: अवरुद्ध करने का समय केवल 5 मिनट है, और सिग्नल-टू-शोर अनुपात बीएसए, स्किम मिल्क पाउडर, कैसिइन और अन्य पारंपरिक अवरोधक एजेंटों की तुलना में अधिक मजबूत है।

निम्न पृष्ठभूमि: इस अवरोधक समाधान में सीरम, एल्ब्यूमिन और अन्य प्रोटीन नहीं होते हैं, जो उच्च सिग्नल-टू-शोर अनुपात सुनिश्चित करता है।

अच्छी अनुकूलता: हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज (एचआरपी), क्षारीय फॉस्फेट (एपी) और बायोटिन लेबल वाले माध्यमिक एंटीबॉडी के साथ संगत; एचआरपी और एपी की गतिविधि को प्रभावित करने वाले कोई संरक्षक नहीं; बायोटिन-आधारित जांच में हस्तक्षेप नहीं करता क्योंकि इसमें बायोटिन नहीं होता है।

उपयोग में आसान: इस उत्पाद में टीबीएसटी है और इसका उपयोग प्राथमिक एंटीबॉडी को पतला करने के लिए सीधे किया जा सकता है।

 

 

गीली बर्फ के साथ जहाज; 2-8 डिग्री पर स्टोर करें; 12 महीने के लिए वैध; यदि लंबे समय तक उपयोग न किया जाए तो -20 डिग्री पर स्टोर करें।

 

 

अवयव	जी2052-500एमएल
प्रोटीन मुक्त रैपिड ब्लॉकिंग बफर	500 एमएल
नियमावली	कॉपी पर

 

 

1. पश्चिमी धब्बा में झिल्ली का अवरुद्ध होना

क) स्थानांतरण पूरा करने के बाद 1-2 मिनट तक टीबीएसटी से धोएं;

बी) झिल्ली के आकार के अनुसार, एक उपयुक्त कंटेनर का चयन करें, झिल्ली को पूरी तरह से कवर करने के लिए एक निश्चित मात्रा में प्रोटीन मुक्त तेज़ अवरोधक समाधान डालें, और इसे 5 मिनट के लिए पेंडुलम या क्षैतिज शेकर पर रखें (प्रश्न 3 देखें) उच्च पृष्ठभूमि होने पर विस्तारित समापन);

ग) प्रोटीन-मुक्त रैपिड ब्लॉकिंग समाधान के साथ प्राथमिक एंटीबॉडी को पतला करें, कमजोर पड़ने के लिए संबंधित प्राथमिक एंटीबॉडी निर्देशों को देखें, और एक प्राथमिक एंटीबॉडी कार्यशील समाधान बनाएं।

डी) सीलिंग पूरी होने के बाद, प्रोटीन मुक्त सीलिंग समाधान डाला गया, 10 सेकंड के लिए टीबीएसटी से धोया गया, और बाद के ऊष्मायन के लिए प्राथमिक एंटीबॉडी कार्यशील समाधान जोड़ा गया।

नोट: प्राथमिक एंटीबॉडी कार्यशील समाधान को पीवीडीएफ या एनसी झिल्ली की सतह को पूरी तरह से कवर करना चाहिए; प्रोटीन मुक्त रैपिड ब्लॉकिंग बफर का मुख्य कार्य पीवीडीएफ या एनसी झिल्ली पर उन साइटों को सील करना है जो प्रोटीन से बंधे नहीं हैं, ताकि पृष्ठभूमि को कम किया जा सके, और डब्ल्यूबी एक्सपोजर पर बैंड की संख्या में वृद्धि का संकेत मिल सकता है कि एंटीबॉडी गैर-विशिष्ट बैंड को पहचानती है, और उसे अन्य अवरोधक बफर (दूध या बीएसए) द्वारा प्रतिस्थापित किया जा सकता है;

 

वेस्टर्न ब्लॉट एफएक्यू संदर्भ तालिका
समस्याएँ	संभावित कारण	समाधान
1. कोई संकेत नहीं	1) पीवीडीएफ या एनसी झिल्लियों पर कम सक्रिय एचआरपी 2) प्राथमिक और द्वितीयक एंटीबॉडी स्रोतों के बीच बेमेल 3) प्राथमिक एंटीबॉडी लक्ष्य एंटीजन को नहीं पहचानती है या उसकी क्षमता कम होती है 4) झिल्ली स्थानांतरण असफल	1) ईसीएल का द्वितीयक ऊष्मायन या झिल्ली के साथ ईसीएल का विस्तारित ऊष्मायन 2) अल्ट्रा सेंसिटिव ईसीएल एक्सपोजर पर स्विच करें 3) नमूना आकार बढ़ाएँ 4) प्राथमिक एंटीबॉडी की सांद्रता बढ़ाएं या अधिक शक्तिशाली प्राथमिक एंटीबॉडी पर स्विच करें, और यह सुनिश्चित करने के लिए एक सकारात्मक नियंत्रण स्थापित करें कि एंटीबॉडी एंटीजन को पहचानती है 5) प्राथमिक एंटीबॉडी प्रजातियों का स्रोत निर्धारित करें और मिलान करने वाले द्वितीयक एंटीबॉडी का चयन करें 6) उचित वैद्युतकणसंचलन और झिल्ली स्थानांतरण सुनिश्चित करने के लिए प्रोटीन मार्कर के साथ वैद्युतकणसंचलन और झिल्ली स्थानांतरण के लिए अनुशंसित
2. तीव्र सिग्नल गिरावट	1) ईसीएल का ख़राब होना 2) पीवीडीएफ या एनसी झिल्लियों पर बहुत अधिक सक्रिय एचआरपी	1) ईसीएल के एक नए बैच के साथ बदलें 2) नमूना मात्रा कम करें 3) प्राथमिक एंटीबॉडी की सांद्रता कम करें 4) द्वितीयक एंटीबॉडी एकाग्रता को कम करें
3. उच्च पृष्ठभूमि	1) संबंधित अभिकर्मकों के साथ सीलर्स की क्रॉस-रिएक्टिविटी 2) अधूरा क्षालन 3) एक्सपोज़र का समय बहुत लंबा है 4) अपर्याप्त अवरोधन	1) प्रोटीन-मुक्त रैपिड ब्लॉकिंग बफर पर स्विच करें 2) विशेष रूप से 0.22 µm पीवीडीएफ झिल्ली के लिए निक्षालन समय उचित रूप से बढ़ाएं 3) एक्सपोज़र का समय कम करें या कम संवेदनशील ईसीएल पर स्विच करें 4) अवरोधन का समय बढ़ाएँ
4. भूरे/पीले बैंड या बैंड जो सफेद विरोधी हैं (भूत बैंड)	1) पीवीडीएफ या एनसी झिल्लियों पर बहुत अधिक सक्रिय एचआरपी, ऑक्सीडेटिव रूप से निष्क्रिय भाग बड़ी मात्रा में जमा हो जाता है और भूरे/पीले बैंड के रूप में दिखाई देने लगता है	1) नमूना मात्रा कम करें 2) प्राथमिक एंटीबॉडी की सांद्रता कम करें 3) द्वितीयक एंटीबॉडी एकाग्रता को कम करें
5. गैर-विशिष्ट बैंड	1) एंटीबॉडी से संबंधित, पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी की तुलना में मोनोक्लोनल एंटीबॉडी के लिए आम तौर पर कम गैर-विशिष्ट बैंड होते हैं 2) नमूना गिरावट	1) अच्छी विशिष्टता और उच्च क्षमता वाला एंटीबॉडी चुनें 2) नए नमूने दोबारा लें
6. पट्टियों के भीतर अदृश्य सफेद धब्बों की उपस्थिति	1) झिल्ली को स्थानांतरित करते समय फिल्टर पेपर और कोलाइड, कोलाइड और झिल्ली, और झिल्ली और फिल्टर पेपर के बीच बुलबुले	1) झिल्ली को स्थानांतरित करते समय, फिल्टर पेपर और कोलाइड, कोलाइड और झिल्ली, और झिल्ली और फिल्टर पेपर के बीच के बुलबुले को हटाना सुनिश्चित करें।
7. बैंड विरूपण	1) जेल उत्पादन के दौरान जेल के भीतर जेल की असमानता 2) वैद्युतकणसंचलन के दौरान उच्च तापमान के कारण कोलाइड का विरूपण 3) स्थानांतरण के दौरान उच्च तापमान के कारण कोलाइड का विरूपण 4) स्थानांतरण के दौरान क्लैंप को अधिक कसने से कोलाइड एक्सट्रूज़न में विकृति आ जाती है	1) जेल एकरूपता सुनिश्चित करने के लिए जेल उत्पादन, विशेष रूप से ऊपरी और निचली जेल परतों के बीच इंटरफ़ेस पर समतलता 2) गर्मी उत्पादन या बर्फ स्नान वैद्युतकणसंचलन को कम करने के लिए कम वोल्टेज के साथ वैद्युतकणसंचलन 3) झिल्ली स्थानांतरण के लिए पूर्ण बर्फ स्नान की आवश्यकता होती है 4) यह सुनिश्चित करने के लिए कि एक निश्चित मात्रा में दबाव हो, स्थानांतरित करते समय क्लैंप बहुत तंग या बहुत ढीले नहीं होने चाहिए

 

2. एलिसा प्रयोग में सब्सट्रेट का अवरुद्ध होना

ए) एंटीजन या एंटीबॉडी कोट एलिसा प्लेटों का उपयोग करें

बी) प्रति कुएं में 300 μL प्रोटीन-मुक्त रैपिड ब्लॉकिंग सॉल्यूशन डालें और 5 मिनट के लिए 37 डिग्री पर इनक्यूबेट करें;

ग) एलिसा आवश्यकताओं के अनुसार धोने या हिलाने जैसे निम्नलिखित कदम जारी रखें।

3. IHC और IF प्रयोगों में अवरोधन

a) इस अभिकर्मक का उपयोग IHC और IF प्रयोगों में 3% (द्रव्यमान से आयतन अनुपात) बीएसए को घोलने के लिए विलायक के रूप में किया जाता है। पीबीएस में घुले बीएसए की तुलना में इसमें स्थिर सीलिंग प्रदर्शन और विभिन्न ऊतकों में उत्कृष्ट सीलिंग प्रभाव है; अच्छी विशिष्टता वाले एंटीबॉडी के लिए, इस अभिकर्मक को सीधे अवरोधक एजेंट के रूप में उपयोग किया जा सकता है।

बी) ऊतक अनुभागों की तैयारी के बाद प्रोटीन मुक्त रैपिड ब्लॉकिंग एजेंट या बीएसए भंग प्रोटीन मुक्त रैपिड ब्लॉकिंग एजेंट जोड़ें, और कमरे के तापमान पर 30 मिनट के लिए छोड़ दें (ऊतक विभेदन के साथ); नमूना सूखने से उच्च पृष्ठभूमि से बचने के लिए नमूने को पूरी तरह से ढकना चाहिए।

 

 

1. किसी भी अवरोधक एजेंट को सभी एंटीजन और एंटीबॉडी डिटेक्शन सिस्टम पर लागू नहीं किया जा सकता है। यदि एंटीबॉडी इस अभिकर्मक के लिए अनुपयुक्त हैं, तो कृपया बीएसए या स्किम्ड मिल्क पाउडर जैसे अन्य अवरोधक एजेंटों को बदलें।

2. उपयोग के बाद प्रदूषण से बचने के लिए बचे हुए घोल को 2-8 डिग्री पर संग्रहित करें।

3. यह अभिकर्मक चिपचिपा है और मात्रा सटीकता सुनिश्चित करने के लिए इसे धीरे-धीरे पिपेट किया जाना चाहिए।

4. इस उत्पाद को केवल एक बार उपयोग करने की अनुशंसा की जाती है, और बार-बार उपयोग से अवरोध प्रभाव कम हो सकता है; अच्छी विशिष्टता और उच्च सिग्नल-टू-शोर अनुपात वाले एंटीबॉडी के लिए, अवरुद्ध समाधान का पुन: उपयोग किया जा सकता है; पुनर्प्राप्त को अप्रयुक्त अवरोधक समाधान के साथ न मिलाएं।

5. अपनी सुरक्षा और स्वास्थ्य के लिए, कृपया सुरक्षा चश्मा, दस्ताने या सुरक्षात्मक कपड़े पहनें।

 

केवल अनुसंधान उपयोग के लिए!

 

 

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