प्लांट सुपरऑक्साइड आयन दाग (एनबीटी)

पौधों के ऊतक तनाव की स्थिति में विभिन्न प्रकार की प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों (आरओएस) का उत्पादन करते हैं। आरओएस गतिविधि बहुत बड़ी और बेहद अस्थिर है, इसलिए आरओएस का पता लगाना आमतौर पर इसके अंतिम उत्पादों पर निर्भर करता है। सुपरऑक्साइड आयन एक प्रकार की प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजाति है, जो एक प्रकार के ऑक्सीजन युक्त मुक्त कण से संबंधित है, एनबीटी (नाइट्रो-ब्लू टेट्राजोलियम) को पानी में अघुलनशील नीले फॉर्मेज़ान यौगिक में कम कर सकता है, जिससे ऊतकों में सुपरऑक्साइड आयन का पता लगाया जा सकता है। इसे बुनियादी सिद्धांतों पर आधारित एनबीटी पद्धति के रूप में भी जाना जाता है। यह उत्पाद पौधों के जीवित ऊतकों में सुपरऑक्साइड आयन धुंधलापन के लिए उपरोक्त सिद्धांत पर आधारित है। यह आम तौर पर कोमल जड़ युक्तियों, पत्तियों आदि के संपूर्ण धुंधलापन पर लगाया जाता है। धुंधला होने के बाद, सुपरऑक्साइड आयन संचय का स्थान नीला से गहरा नीला होता है।

गीली बर्फ परिवहन; प्रकाश से 2-8 डिग्री दूर स्टोर करें, 12 महीने के लिए वैध।

1. अभिकर्मक तैयारी: एनबीटी धुंधला कार्य समाधान प्राप्त करने के लिए 50 मिलीग्राम एनबीटी को 100 एमएल ट्रिस बफर (पीएच 7.4) में पूरी तरह से भंग कर दिया गया था, जिसे प्रकाश के तहत 4 डिग्री पर संग्रहीत किया गया था और एक सप्ताह के भीतर प्रभावी था।

2. अंकुर या जड़ के सिरे इकट्ठा करें, उन्हें शुद्ध पानी से धोएं, और अतिरिक्त पानी को फिल्टर पेपर पर सोख लें। पौधे के अंकुरों या जड़ के सिरों को कमरे के तापमान पर एनबीटी स्टेनिंग वर्किंग सॉल्यूशन में डुबोएं और जब तक सकारात्मक हिस्से गहरे नीले न दिखें, और बाकी हिस्से हल्के नीले या लगभग रंगहीन या पौधे के रंग के न हो जाएं, तब तक रोशनी से बचें। (पौधे की युवावस्था की डिग्री के अनुसार, रंग विकास की डिग्री रंगाई के समय को समायोजित करती है)।

3. पौधों के अंकुरों या पत्तियों को चिमटी से सावधानीपूर्वक हटाएं, शुद्ध पानी से 3-5 बार धोएं, अतिरिक्त पानी सोखने के लिए उन्हें फिल्टर पेपर पर रखें, और फिर उन्हें 95% इथेनॉल में 95% इथेनॉल में 95% घंटे के लिए डुबोएं। पौधों के अंकुरों या पत्तियों से क्लोरोफिल या हल्के नीले रंग की पृष्ठभूमि को हटाने के लिए 40 डिग्री। ताज़ा 95% इथेनॉल को उपचार के दौरान कई बार बदला जा सकता है।

4. अंकुरों या पत्तियों को चिमटी से निकालें, उन्हें शुद्ध पानी में डुबोएं और उन्हें 3-5 बार धोएं, अतिरिक्त पानी निकालने के लिए उन्हें फिल्टर पेपर पर रखें, नमूनों को उचित मात्रा में एनबीटी नमूना संरक्षण समाधान में डालें और भिगोएँ 30 मिनट के लिए, फिर तस्वीरें निकाल लें। नमूनों को घोल में कमरे के तापमान पर एक सप्ताह तक संग्रहीत किया जा सकता है।

1. एनबीटी स्टेनिंग घोल तैयार करने के बाद इसे अंधेरे में 4 डिग्री पर संग्रहित किया जाना चाहिए और एक सप्ताह के भीतर उपयोग किया जाना चाहिए। भंडारण का समय बहुत लंबा है, रंग पर असर पड़ेगा।

2. चूंकि कोई भी बाहरी कारक सुपरऑक्साइड आयन उत्पन्न करने के लिए पौधे के तनाव को उत्तेजित कर सकता है, इसलिए पौधे के नमूनों को जल्द से जल्द ताजा और दागदार एकत्र किया जाना चाहिए। नकारात्मक और सकारात्मक रिक्त नियंत्रण समूह की अनुशंसा की जाती है.

3. नमूना धुंधला होने के बाद परिणामों को सहेजने के लिए जितनी जल्दी हो सके तस्वीरें लें।

4. ऑपरेशन के दौरान लैब कोट और डिस्पोजेबल दस्ताने पहनें।

केवल अनुसंधान उपयोग के लिए!

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