उत्पाद परिचय
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प्रोडक्ट का नाम |
बिल्ली.सं. |
विशेष. |
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RNase अवशेष जांच किट |
G3058-100T |
100 T |
विवरण/परिचय
राइबोन्यूक्लिज़ (RNase) एक प्रकार का RNA हाइड्रोलेज़ है, जो आम तौर पर पर्यावरण में मौजूद होता है, और इसमें कुछ बायोमटेरियल, एंजाइम और अभिकर्मकों में उच्च सांद्रता वाले अवशेष होते हैं, जो RNA के संबंधित प्रायोगिक संचालन पर बहुत प्रतिकूल प्रभाव डालते हैं। इसलिए, RNase के संपर्क में आने वाले किसी भी घोल या बायोमटेरियल में RNA के अवशेषों का पता लगाना आवश्यक है।
किट में एक अद्वितीय RNA संशोधित सब्सट्रेट (RNase सब्सट्रेट) होता है, जो RNase की गतिविधि का शीघ्र और संवेदनशील रूप से पता लगा सकता है। आरएनए संशोधित सब्सट्रेट में एक छोर पर एक प्रतिदीप्ति समूह और दूसरे छोर पर एक शमन समूह होता है। जब कोई RNase नहीं होता है, तो शमन समूह प्रतिदीप्ति समूह के करीब होता है, जो प्रतिदीप्ति समूह की प्रतिदीप्ति को बहुत निम्न स्तर तक दबा देता है। RNase की उपस्थिति में, RNA संशोधित सब्सट्रेट को हाइड्रोलाइज्ड किया जाता है, प्रतिदीप्ति समूह और शमन समूह को अंतरिक्ष में अलग किया जाता है, और प्रतिदीप्ति समूह बड़ी संख्या में प्रतिदीप्ति संकेत उत्पन्न करता है। चूंकि आरएनए सब्सट्रेट की प्रतिदीप्ति आरएनएएस गतिविधि में वृद्धि के साथ बढ़ती है, एंजाइम-लेबल उपकरण द्वारा मॉनिटर किए गए परिणामों का काइनेटिक रूप से मूल्यांकन किया जा सकता है।
किट डिटेक्शन सिस्टम के सकारात्मक नियंत्रण के रूप में RNase A प्रदान करता है, और कम से कम 0.5 pg तक RNase A का पता लगा सकता है। RNase A की गतिविधि का पता लगाने के अलावा, यह RNase T1, माइक्रोकोकल न्यूक्लिज़, S1 न्यूक्लिज़, मूंग बीन न्यूक्लिज़ और बेंज़ोनेज़ आदि की गतिविधि का भी पता लगा सकता है। इसके अलावा, किट DNase डिटेक्शन सिस्टम के साथ संगत है। क्योंकि आरएनए सब्सट्रेट और डीएनए सब्सट्रेट में दो अलग-अलग प्रतिदीप्ति लेबल होते हैं, दो प्रकार के सब्सट्रेट को एक ही प्रतिक्रिया प्रणाली में जोड़ा जा सकता है, और एक ही नमूने में आरएनएएस और डीनेज़ का वास्तविक समय विश्लेषण एंजाइम-लेबल उपकरण द्वारा किया जा सकता है।
भंडारण और रख-रखाव की स्थितियाँ
गीली बर्फ के साथ भेजा गया और -20 डिग्री पर संग्रहित किया गया। 1 वर्ष तक के लिए वैध।
उत्पाद सामग्री
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घटक संख्या |
अवयव |
G3608-50T |
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G3058-1 |
10×रिएक्शन बफर |
2×1 एमएल |
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G3058-2 |
आरएनएसई ए (1 यू/μL) |
10 μL |
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G3058-3 |
RNase सब्सट्रेट |
200 μL |
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G3058-4 |
ZnSO4 (100 मिमी) |
200 μL |
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G3058-5 |
न्यूक्लियस मुक्त पानी |
20 एमएल |
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नियमावली |
कॉपी पर |
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शुरू करने से पहले (कृपया ध्यान से पढ़ें)
1. 96-अच्छी तरह से काली एंजाइम प्लेट (न्यूक्लीज़-मुक्त)।
2. न्यूक्लियस-मुक्त पिपेट और टिप्स।
परख प्रोटोकॉल/प्रक्रियाएँ
1. प्रतिक्रिया प्रणाली तैयार करने से पहले:
एक। मानक वक्र बनाने के लिए RNase A सांद्रता ग्रेडिएंट्स की एक श्रृंखला को पतला करना: RNase A (10 mg/mL) को 0.25 pg/μL, 0.5 pg/μL तक पतला किया गया था , 1 पीजी/μL और 2 पीजी/μL न्यूक्लिज़-मुक्त पानी के साथ। RNase A को नकारात्मक नियंत्रण के रूप में जोड़े बिना, 10 μL को 96- वेल एंजाइम प्लेट में जोड़ा गया था, और RNase A की अंतिम मात्रा 0, 2.5 pg, 5 pg, 10 pg और 20 pg थी।
बी। नमूना तैयार करना: यदि परीक्षण किया जाने वाला नमूना तरल है, तो इसका सीधे उपयोग किया जा सकता है; यदि परीक्षण किया जाने वाला नमूना ठोस है, तो नमूना लेने के बाद, इसे स्टैंडबाय के लिए तरल नमूना तैयार करने के लिए न्यूक्लिज़-मुक्त पानी में भिगोया जाना चाहिए।
2. निम्नलिखित तालिका के संदर्भ में प्रतिक्रिया प्रणाली तैयार करें:
प्रतिक्रिया प्रणाली तैयार करते समय, कृपया नीचे दी गई तालिका के अनुसार किट के संबंधित घटकों को वेल प्लेट में जोड़ें:
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अवयव |
माइनस-RNase नियंत्रण |
प्लस-RNase नियंत्रण |
प्रायोगिक नमूने |
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10×रिएक्शन बफर |
10 μL |
10 μL |
10 μL |
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आरएनएसई ए |
0 |
10 μL |
0 |
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नमूना |
0 |
0 |
10 μL |
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RNase सब्सट्रेट |
2 μL |
2 μL |
2 μL |
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न्यूक्लियस मुक्त पानी |
100 μL तक |
100 μL तक |
100 μL तक |
नोट: RNase सबस्ट्रेट को प्रतिक्रिया प्रणाली में अंत में जोड़ा जाना चाहिए, ताकि पहले से ही ख़राब होने से बचा जा सके। यदि पाया गया न्यूक्लिज़ Zn2+-निर्भर है, जैसे मूंग बीन न्यूक्लिज़, S1 न्यूक्लिज़, आदि, तो प्रतिक्रिया प्रणाली में 1 μL 100 mM ZnSO4 जोड़ें।
3. पता लगाना: पर्याप्त मिश्रण सुनिश्चित करने के लिए प्रतिक्रिया प्रणाली को हिलाकर या धीरे से उड़ाकर मिश्रित किया गया था और फिर तुरंत एक एंजाइम लेबलर का उपयोग करके पता लगाया गया था। एंजाइम-लेबल उपकरण का पता लगाने का तापमान 37 डिग्री पर सेट करें (यदि कोई तापमान सेटिंग नहीं है, तो कमरे के तापमान पर एंजाइम गतिविधि कम हो सकती है), उत्तेजना/उत्सर्जन तरंग दैर्ध्य 492/518 है, 30 मिनट लगातार पता लगाया जाता है, और समय अंतराल 2 मिनट है (पता लगाने का समय RNase सामग्री के अनुसार समायोजित किया जा सकता है, और जब सामग्री कम होती है, तो पता लगाने का समय 60 मिनट तक बढ़ाया जा सकता है, और अंतराल 5 मिनट है)।
4. अवशिष्ट RNase A की मात्रा की गणना मानक वक्र से की जा सकती है।
टिप्पणी
1. कृपया उपयोग से पहले उत्पाद मैनुअल को ध्यान से पढ़ें।
2. चूंकि राइबोन्यूक्लिअस पर्यावरण में व्यापक रूप से मौजूद है, इसलिए नमूनों के संदूषण से बचने के लिए इसे एक साफ बेंच या जैव सुरक्षा कैबिनेट में संचालित करना सुनिश्चित करें।
3. RNase सब्सट्रेट को पहले से ख़राब होने से बचाने के लिए प्रतिक्रिया प्रणाली की तैयारी को बर्फ पर संचालित करने की आवश्यकता है।
4. पता लगाने की सटीकता सुनिश्चित करने के लिए, कृपया कम से कम दो डुप्लिकेट छेद तैयार करें।
5. यदि RNase A के सटीक अवशेष का पता लगाने की आवश्यकता नहीं है, तो मानक वक्र बनाने की कोई आवश्यकता नहीं है।
6. प्रतिक्रिया समाधान की तैयारी बर्फ पर की जानी चाहिए।
7. RNase सबस्ट्रेट को प्रकाश से बचाया जाना चाहिए, और प्रतिक्रिया समाधान तैयार करते समय तेज़ रोशनी से बचना चाहिए।
8. जहां तक संभव हो नमूनों के बीच क्रॉस-संदूषण से बचने के लिए प्रतिक्रिया समाधान की तैयारी और उप-पैकेजिंग के लिए न्यूक्लिज़-मुक्त पिपेट युक्तियों का उपयोग किया जाना चाहिए।
केवल अनुसंधान उपयोग के लिए!
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