पॉलीसेकेराइड और पॉलीफेनोलिक्स के लिए प्लांट आरएनए किट

 

प्रोडक्ट का नाम	बिल्ली.सं.	विशेष.
पॉलीसेकेराइड और पॉलीफेनोलिक्स के लिए प्लांट आरएनए किट	G3641-50T	50T

 

 

यह किट सिलिका जेल झिल्ली शुद्धि विधि के साथ संयुक्त एक विशेष लिसीस बफर सिस्टम का उपयोग करके पॉलीसेकेराइड और पॉलीफेनोल्स से समृद्ध विभिन्न पौधों के ऊतकों के नमूनों (जैसे पत्तियां, बीज, फल इत्यादि) से आरएनए निकाल सकती है। यह किट पौधों के ऊतकों के नमूनों में पॉलीसेकेराइड, पॉलीफेनोल्स, प्रोटीन, कोशिका के टुकड़े और अन्य अशुद्धियों को प्रभावी ढंग से हटा सकती है, और एक के भीतर 20-200 मिलीग्राम पौधे के ऊतकों के नमूने से उच्च शुद्धता और उच्च-अखंडता आरएनए के दसियों माइक्रोग्राम तक शुद्ध कर सकती है। घंटा। फिनोल और क्लोरोफॉर्म जैसे किसी कार्बनिक अभिकर्मक की आवश्यकता नहीं है। निकाले गए उच्च शुद्धता वाले आरएनए का उपयोग सीधे विभिन्न आणविक जीव विज्ञान प्रयोगों जैसे उत्तरी संकरण, स्पॉट संकरण, एमआरएनए शुद्धि, इन विट्रो अनुवाद, आरटी-पीसीआर, आरटी-क्यूपीसीआर, सीडीएनए लाइब्रेरी निर्माण आदि में किया जा सकता है।

 

 

DNase, DTT सॉल्यूशन को गीली बर्फ में ले जाया जाता है और -20 डिग्री पर संग्रहित किया जाता है; शेष अभिकर्मकों को कमरे के तापमान पर ले जाया और संग्रहीत किया जाता है; समाप्ति तिथि 12 महीने है.

 

 

घटक संख्या	अवयव	G3641-50T
G3641-1	बफर PRL1	30 एमएल
G3641-2	बफर PRL2	8 एमएल
G3641-3	बफर PRL3	30 एमएल
G3641-4	बफर आरडब्ल्यूए	18 एमएल
G3641-5	बफर आरडब्ल्यूबी	20 एमएल
G3641-6	डीटीटी समाधान	1.2 एमएल
G3641-7	डीएनएसई	250 μL
G3641-8	10×DNase बफर	500 μL
G3641-9	न्यूक्लियस मुक्त पानी	10 एमएल
G3641-10	आरएनए स्पिन कॉलम (संग्रह ट्यूबों के साथ)	50 सेट
नियमावली		कॉपी पर

 

 

1. यदि बफर पीआरएल1 अवक्षेपित हो जाता है, तो कृपया इसे 37 डिग्री पर गर्म करें और कमरे के तापमान पर बहाल होने पर इसका उपयोग करें।

2. उपयोग से पहले, कृपया बफर पीआरएल3 में डीटीटी सॉल्यूशन मिलाएं जब तक कि अंतिम सांद्रता 4% न हो जाए, यानी 1 एमएल बफर पीआरएल3 में 40 µL डीटीटी सॉल्यूशन मिलाएं। यह लाइसेट ताजा तैयार करना सबसे अच्छा है, डीटीटी सॉल्यूशन में जोड़ा गया बफर पीआरएल 3 एक महीने के लिए 4 डिग्री पर संग्रहीत किया जा सकता है।

3. उपयोग से पहले, कृपया बफर आरडब्ल्यूए में 12 एमएल एब्सोल्यूट इथेनॉल और बफर आरडब्ल्यूबी में 80 एमएल एब्सोल्यूट इथेनॉल मिलाएं।

4. ग्राइंडर से पीसते समय ग्राइंडर को पहले से ही ठंडा कर लें.

 

 

1. पौधों के ऊतकों का विश्लेषण:

एक। पौधों की पत्तियों के लिए, अनुशंसित नमूना मात्रा {{0}} मिलीग्राम है। ताजा या क्रायोप्रिजर्व्ड पौधे के ऊतकों को 2.0 एमएल न्यूक्लीज-मुक्त ग्राइंडिंग ट्यूब (अनुशंसित एचटी-200-एम) में स्थानांतरित करें जिसमें 3-4 3 मिमी ज़िरकोनिया मोती (अनुशंसित जी0203-150जी) हों और तरल के साथ पहले से ठंडा किया गया हो। नाइट्रोजन. ग्राइंडर ट्यूब को ग्राइंडर पर रखें (अनुशंसित KZ{8}}F-3D) (ग्राइंडिंग ट्यूब रखने से पहले एडॉप्टर को तरल नाइट्रोजन में तुरंत प्रीकूल करें। अनुशंसित पीसने की प्रक्रिया: आवृत्ति को 60 HZ, तापमान को 60 HZ पर सेट करें 4 डिग्री, हर बार 30 सेकंड के लिए पीसें, प्रक्रिया को 4 बार दोहराएं, प्रत्येक पीस के बीच 5 सेकंड का अंतराल रखें) और तब तक पीसें जब तक कि यह पूरी तरह से पाउडर न हो जाए (यदि ऊतक पूरी तरह से पाउडर में पीस नहीं गया है, तो यह प्रभावित करेगा) आरएनए की उपज और गुणवत्ता। पीसने का समय तब तक बढ़ाया जा सकता है जब तक कि ऊतक पूरी तरह से पीस न जाए)। एक बार पीसने का काम पूरा हो जाने पर, पीसने वाली ट्यूब में 500 μL बफर पीआरएल1 डालें, सामग्री को उल्टा मिलाएं और 15 मिनट के लिए 56 डिग्री पर इनक्यूबेट करें, हर 5 मिनट में उल्टा मिलाएं।

बी। पौधों के बीजों के लिए, अनुशंसित नमूना मात्रा {{0} मिलीग्राम है, और फलों के लिए 100-200 मिलीग्राम है। 2.0 एमएल न्यूक्लिज़-मुक्त ग्राइंडिंग ट्यूब (अनुशंसित एचटी-200-एम) में पहले से 500 μL बफर पीआरएल1 जोड़ें, और फिर 3-4 4 मिमी स्टील बीड्स (अनुशंसित जी{{9) जोड़ें }}जी)। ताजा या क्रायोप्रिजर्व्ड पौधे के ऊतकों को 2.0 एमएल न्यूक्लीज़-मुक्त ग्राइंडिंग ट्यूब में स्थानांतरित करें। पीसने वाली ट्यूब को ग्राइंडर पर रखें (अनुशंसित KZ-5F-3D) (अनुशंसित पीसने की प्रक्रिया: आवृत्ति को 70 HZ, तापमान को 4 डिग्री पर सेट करें, हर बार 30 सेकंड के लिए पीसें, प्रक्रिया को दोहराएं) प्रत्येक पीस के बीच 5 सेकंड के अंतराल के साथ 20-30 बार) और तब तक पीसें जब तक कि यह पूरी तरह से एकरूप न हो जाए (यदि ऊतक को एकरूप होने के लिए पूरी तरह से पीसा नहीं गया है, तो यह उपज और गुणवत्ता को प्रभावित करेगा) आरएनए। पीसने का समय तब तक बढ़ाया जा सकता है जब तक कि ऊतक पूरी तरह से पीस न जाए)। एक बार पीसने का काम पूरा हो जाने पर, 15 मिनट के लिए 56 डिग्री पर सेते रहें, हर 5 मिनट में उल्टा मिलाते रहें।

2. कमरे के तापमान पर 5 मिनट के लिए 12,{2}} आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज करें, सतह पर तैरनेवाला को एक नई 1.5 एमएल सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में स्थानांतरित करें। बफ़र पीआरएल2 का 1/5 सतह पर तैरनेवाला मात्रा डालें, पूरी तरह से उल्टा करें और अच्छी तरह मिलाएँ।

3. 12, 000 आरपीएम पर 5 मिनट के लिए 4 डिग्री पर सेंट्रीफ्यूज करें, सतह पर तैरनेवाला को एक नए 2. 0 एमएल सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में स्थानांतरित करें। सतह पर तैरनेवाला में 500 μL बफर पीआरएल3 जोड़ें (सुनिश्चित करें कि आपने उपयोग से पहले डीटीटी समाधान जोड़ा है), पूरी तरह से उल्टा करें और अच्छी तरह मिलाएं।

4. पिछले चरण के मिश्रण में आइसोप्रोपेनॉल की 1/2 मात्रा डालें, पूरी तरह से उल्टा करें और अच्छी तरह मिलाएँ।

5. मिश्रण को आरएनए स्पिन कॉलम में स्थानांतरित करें। प्रत्येक जोड़ 600 μL से अधिक नहीं है, यदि अधिक है, तो इसे बैचों में जोड़ा जा सकता है।

6. कमरे के तापमान पर 1 मिनट के लिए 12,{2}} आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज करें, और निस्पंद को हटा दें। आरएनए स्पिन कॉलम को वापस कलेक्शन ट्यूब में डालें।

7. आरएनए स्पिन कॉलम में 500 μL बफर आरडब्ल्यूए जोड़ें, और कमरे के तापमान पर 1 मिनट के लिए 12,{3}} आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज करें, फिर निस्पंद को हटा दें।

8. आरएनए स्पिन कॉलम में 600 μL बफर आरडब्ल्यूबी जोड़ें (पाइप की दीवार पर बचे हुए नमक को फ्लश करने में मदद करने के लिए कृपया पाइप की दीवार के साथ बफर आरडब्ल्यूबी जोड़ें), और कमरे के तापमान पर 1 मिनट के लिए 12, {3}} आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज करें। फिर छानकर निकाल दें।

9. DNase पाचन:

क) DNase प्रतिक्रिया समाधान की तैयारी: एक नई 1.5 mL न्यूक्लीज़-मुक्त सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में 5 μL 10 × DNase बफर, 5 μL DNase, 40 μL न्यूक्लीज़-मुक्त पानी मिलाएं;

बी) आरएनए स्पिन कॉलम के केंद्र में 50 μL DNase प्रतिक्रिया समाधान जोड़ें, और कमरे के तापमान पर 15 मिनट तक खड़े रहें;

ग) आरएनए स्पिन कॉलम में 500 μL बफर आरडब्ल्यूबी जोड़ें, और कमरे के तापमान पर 30 एस के लिए 12, {2}} आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज करें, फिर निस्पंद को हटा दें। आरएनए स्पिन कॉलम को वापस संग्रह ट्यूब में डालें।

10. चरण 8 दोहराएँ।

11. आरएनए स्पिन कॉलम को कलेक्शन ट्यूब में डालें, बचे हुए तरल को निकालने के लिए कमरे के तापमान पर 2 मिनट के लिए 12,{2}} आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज करें।

12. आरएनए स्पिन कॉलम को एक नए 1.5 एमएल न्यूक्लिज-मुक्त सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में स्थानांतरित करें, कमरे के तापमान पर 3 ~ 5 मिनट तक खड़े रहें, ताकि आरएनए स्पिन कॉलम का अवशिष्ट इथेनॉल पूरी तरह से वाष्पित हो सके।

13. आरएनए स्पिन कॉलम के केंद्र में μL न्यूक्लिज़-मुक्त पानी डालें, 5 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर रखें। आरएनए एकत्र करने के लिए कमरे के तापमान पर 2 मिनट के लिए 12,{5}} आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज करें। आरएनए की उच्च सांद्रता प्राप्त करने के लिए, आप पहले एलुएंट को आरएनए स्पिन कॉलम में भी जोड़ सकते हैं, फिर 5 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर खड़े रहें और आरएनए को फिर से इकट्ठा करने के लिए कमरे के तापमान पर 2 मिनट के लिए 12, {9}} आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज करें। .

 

 

1. संचालन करते समय कृपया लैब कोट और डिस्पोजेबल दस्ताने पहनें।

2. क्रॉस-संदूषण से बचने के लिए RNase-मुक्त प्लास्टिक उत्पादों और युक्तियों का उपयोग करें।

3. आरएनए ऑपरेशन के लिए विशेष परीक्षण बेंच और इलेक्ट्रोफोरेसिस उपकरण का उपयोग करें, और इस्तेमाल किए गए बर्तनों और अभिकर्मकों को आरएनएएस प्रदूषण से बचाने के लिए ऑपरेशन के दौरान मास्क पहनें।

4. यदि पौधों के नमूने प्रयोगशाला के बाहर एकत्र किए जाते हैं, तो आरएनए की उपज और गुणवत्ता को प्रभावित होने से बचाने के लिए नमूनों को तरल नाइट्रोजन में रखा जाना चाहिए।

5. अधिक जल सामग्री वाले नमूनों के लिए, प्रारंभिक नमूना आकार उचित रूप से बढ़ाया जा सकता है।

 

 

इस किट द्वारा विभिन्न प्रकार के पौधों और कवक के नमूनों से निकाली गई आरएनए उपज नीचे दी गई तालिका में दिखाई गई है। आरएनए उपज पौधों की प्रजातियों, अंगों, ताजगी और विकास की स्थिति से संबंधित है। निम्नलिखित तालिका केवल संदर्भ के लिए है।

 

नमूना प्रकार	नमूना नाम	आरएनए उपज
पत्ता	गॉसिपियम हिर्सुटम	40-45 कुरूप/80 मि.ग्रा
	रोज़ा चिनेंसिस	50-60 कुरूप/50 मि.ग्रा
	पाइनस	5-8 कुरूप/50 मि.ग्रा
	ब्रायोफिलम पिन्नटम	5-8 कुरूप/150 मि.ग्रा
बीज	अरचिस हाइपोगिया	15-20 कुरूप/50 मि.ग्रा
	ट्रिटिकम एस्टिवम	5-8 कुरूप/50 मि.ग्रा
	ब्रैसिका नेपस	20-25 कुरूप/20 मि.ग्रा
	गॉसिपियम हिर्सुटम	20-25 कुरूप/20 मि.ग्रा
फल	लाइकोपर्सिकॉन एस्कुलेंटम	20-25 कुरूप/150 मि.ग्रा
कंद	सोलनम ट्यूबरोसम	10-13 कुरूप/200 मि.ग्रा

 

केवल अनुसंधान उपयोग के लिए!

 

 

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