विवरण

तकनीकी पैरामीटर

उत्पाद परिचय

प्रोडक्ट का नाम	बिल्ली.सं.	विशेष.
यूडीजी के साथ 2×मल्टीप्लेक्स जांच क्यूपीसीआर मास्टर मिक्स (कोई भी आरओएक्स नहीं)	G3347-01	1 एमएल
	G3347-05	5×1 एमएल
	G3347-15	15×1 एमएल

उत्पाद विवरण/परिचय

यह उत्पाद जांच विधि पर आधारित 2×प्रतिदीप्ति मात्रात्मक पीसीआर प्रीमिक्सचर (कोई नहीं आरओएक्स) है, इसमें हॉट-स्टार्ट टैकडीएनए पोलीमरेज़, डीएनटीपी और आवश्यक बफर घटक शामिल हैं, और एक साथ एक ही प्रतिक्रिया ट्यूब में चौगुनी प्रतिदीप्ति मात्रात्मक पीसीआर प्रतिक्रिया तक प्रदर्शन कर सकते हैं। प्रीमिक्स में सुधार रंग नहीं हैं और यह आरओएक्स सुधार के बिना उपकरणों के लिए उपयुक्त है। इस उत्पाद में नीली गैर-फ्लोरोसेंट डाई जोड़ने से नमूनाकरण त्रुटियों से बचा जा सकता है। इसके अलावा, उत्पाद में यूरेसिल-डीएनएग्लाइकोसिलेज़ (यूडीजी) और विशेष रूप से अनुकूलित डीयूटीपी अतिरिक्त मात्रा भी शामिल है, जो टेम्पलेट अवशिष्ट संदूषण को रोक सकती है और उत्पाद की विशिष्टता, संवेदनशीलता और सटीकता में सुधार कर सकती है।

भंडारण और रख-रखाव की स्थितियाँ

गीली बर्फ के साथ जहाज और -20 डिग्री पर भंडारण; 12 महीने के लिए वैध.

उत्पाद अंतर्वस्तु

घटक संख्या	अवयव	G3347-01	G3347-05	G3347-15
G3347-01	यूडीजी के साथ 2×मल्टीप्लेक्स जांच क्यूपीसीआर मास्टर मिक्स (कोई भी आरओएक्स नहीं)	1 एमएल	5×1 एमएल	15×1 एमएल
नियमावली		कॉपी पर

शुरू करने से पहले (कृपया ध्यान से पढ़ें)

1. वास्तविक समय प्रतिदीप्ति मात्रात्मक पीसीआर उपकरण की आवश्यकता है।

2. प्रयोग के लिए विशेष क्यूपीसीआर प्रतिक्रिया ट्यूब या प्रतिक्रिया प्लेट की आवश्यकता होती है।

3. क्यूपीसीआर प्राइमर और जांच (संदर्भ प्राइमर और जांच डिजाइन सिद्धांत) आवश्यक हैं।

परख शिष्टाचार / प्रक्रियाओं

1. पीसीआर प्रतिक्रिया प्रणाली की सिफारिश करें:

अवयव	20 μL आरएक्सएन	अंतिम एकाग्रता
यूडीजी के साथ 2×मल्टीप्लेक्स जांच क्यूपीसीआर मास्टर मिक्स (कोई भी आरओएक्स नहीं)	10 μL	1×
फॉरवर्ड प्राइमर (10 μM)a	चर	0.1~0.5 μM
रिवर्स प्राइमर (10 μM)a	चर	0.1~0.5 μM
जांच (10 μM)a	चर	0.1~0.5 μM
Templateb	चर	आवश्यकता अनुसार
न्यूक्लियस मुक्त पानी	20 μL में जोड़ें

एक। आमतौर पर, एक अच्छा प्रवर्धन प्रभाव {{0}}.2 μM की अंतिम सांद्रता के साथ प्राप्त किया जा सकता है। जब प्रतिक्रिया प्रदर्शन खराब होता है, तो प्राइमर एकाग्रता को 0.1~0.5 μM की सीमा में समायोजित किया जा सकता है।

बी। टेम्प्लेट जोड़ की मात्रा टेम्प्लेट समाधान में लक्ष्य जीन की प्रतियों की संख्या के साथ भिन्न होती है। ग्रेडिएंट टेम्पलेट को पतला करें और टेम्पलेट जोड़ की उचित मात्रा की जांच करें। 20 μL प्रतिक्रिया प्रणाली में, टेम्पलेट डीएनए की मात्रा 100 एनजी से कम होनी चाहिए। टेम्पलेट के रूप में आरटी-पीसीआर प्रतिक्रिया के सीडीएनए (आरटी प्रतिक्रिया समाधान) का उपयोग करते समय, अतिरिक्त मात्रा पीसीआर प्रतिक्रिया समाधान की कुल मात्रा के 10% से अधिक नहीं होनी चाहिए।

2. पीसीआर प्रतिक्रिया प्रक्रिया (मॉडल के अनुसार समायोजित की जा सकती है):

A. दो-चरणीय विधि					बी. तीन चरण विधि
अवस्था	कदम	चक्र	अस्थायी	समय	अवस्था	कदम	चक्र	अस्थायी	समय
प्रथम चरण	यूडीजी इन्क्यूबेशन	1	50 डिग्री	2 मिनट	प्रथम चरण	यूडीजी इन्क्यूबेशन	1	50 डिग्री	2 मिनट
चरण 2	के पूर्व विकृतीकरण	1	95 डिग्री	30 सेकंड	चरण 2	के पूर्व विकृतीकरण	1	95 डिग्री	30 सेकंड
चरण 3	विकृतीकरण	40	95 डिग्री	15 सेकंड	चरण 3	विकृतीकरण	40	95 डिग्री	15 सेकंड
	एनीलिंग /विस्तार		60 डिग्री	30 सेकंड		एनीलिंग		55-65 डिग्री	10 सेकंड
						विस्तार		72 डिग्री	30 सेकंड

एक। प्रवर्धन की विशिष्टता में सुधार के लिए, दो-चरणीय प्रक्रिया का उपयोग किया जा सकता है या एनीलिंग तापमान बढ़ाया जा सकता है। प्रवर्धन दक्षता में सुधार के लिए, तीन-चरणीय प्रक्रिया का उपयोग किया जा सकता है या विस्तार समय बढ़ाया जा सकता है।

टिप्पणी

1. पिघलने के बाद, कृपया धीरे-धीरे ऊपर और नीचे मिलाएं, भंवर न बनाएं, बुलबुले से बचें, उपयोग से पहले अच्छी तरह मिलाएं।

2. प्रतिक्रिया समाधान तैयार करते समय, कृपया अभिकर्मक को बर्फ पर रखें।

3. उत्पाद में फ्लोरोसेंट रंग होते हैं, इसलिए क्यूपीसीआर प्रतिक्रिया समाधान तैयार करते समय तेज रोशनी से बचना चाहिए।

4. क्रॉस संदूषण से बचने के लिए प्रतिक्रिया मिश्रण की तैयारी के लिए नई डिस्पोजेबल युक्तियों का उपयोग किया जाना चाहिए।

5. मास्टर मिक्स के फ्रीज-पिघलने के चक्र से बचें, और पिघलने के बाद एक महीने के भीतर इसका उपयोग करने का प्रयास करें।

संगत उपकरण

एबीआई: पिकोरियलटीएम साइक्लर;

बायो-रेड: CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ5™, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon 2, Chromo4™;

एप्पेंडॉर्फ: रीयलप्लेक्स 2एस, मास्टरसाइक्लर® ईपी, रीयलप्लेक्स;

IIIumina: इको क्यूपीसीआर;

सेफिड: स्मार्टसाइक्लर®;

क्यूजेन कॉर्बेट: रोटर-जीन® श्रृंखला;

रोश: लाइटसाइक्लर™ श्रृंखला;

तकारा: थर्मल साइक्लर पासा श्रृंखला;

विश्लेषण: qTOWER श्रृंखला;

हांग्जो बोरी: लाइनजीन श्रृंखला;

प्राइमर डिज़ाइन सिद्धांत

टैकमैन प्राइमर डिज़ाइन सिद्धांत

1. प्राइमर डिजाइन करने से पहले जांच का निर्धारण करें।

2. प्राइमर डिज़ाइन करते समय, जांच को ओवरलैप किए बिना जांच के जितना संभव हो उतना करीब पहुंचें।

3. लगातार 4 या अधिक जी का उपयोग करने से बचें।

4. प्रत्येक प्राइमर का Tm मान 58~60 डिग्री होना चाहिए।

5. प्राइमर के अंत में अंतिम 5 न्यूक्लियोटाइड में 2 G और C से अधिक नहीं हो सकते।

6. बेहतर होगा कि प्राइमर में स्व-पूरक अनुक्रम न हों, अन्यथा वे हेयरपिन बना देंगे।

7. जीनोम के प्रवर्धन से बचने के लिए, एक्सॉन में प्राइमर डिज़ाइन करना सबसे अच्छा है।

8. सर्वोत्तम पीसीआर दक्षता प्राप्त करने के लिए प्रवर्धन उत्पाद की लंबाई 50~150 बीपी होनी चाहिए।

9. एनसीबीआई पर तुलना परिणामों में कोई अन्य गैर-विशिष्ट उत्पाद नहीं पाया गया।

तक्मान जांच डिजाइन सिद्धांत

1. जांच की लंबाई 13~25 बीपी होनी चाहिए (यदि पारंपरिक टैकमैन जांच का उपयोग किया जाता है तो 13~30 बीपी)।

2. टीएम मान 65 डिग्री ~ 70 डिग्री होना चाहिए, जो आमतौर पर प्राइमर के टीएम मूल्य से 5 डिग्री ~ 10 डिग्री अधिक है ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि एनीलिंग के दौरान जांच अधिमानतः लक्ष्य जीन से जुड़ती है।

3. प्राइमर के लिए ग्वानिन-साइटोसिन (जी+सी) की मात्रा 40% से 70% के बीच होनी चाहिए।

4. जांच के 5' सिरे पर G का उपयोग करने से बचना चाहिए, क्योंकि 5' सिरे वाले G पर शमन प्रभाव होगा, भले ही इसे काट दिया जाए।

5. पूरी जांच में, सी की सामग्री स्पष्ट रूप से जी की तुलना में अधिक है, और जी की उच्च सामग्री का शमन प्रभाव होगा, इसलिए हम जांच के रूप में एक और युग्मित श्रृंखला चुन सकते हैं।

टैकमैन एमजीबी जांच डिजाइन सिद्धांत

1. एक रिपोर्ट डाई (उदाहरण के लिए, FAMTM) जांच के 5' सिरे से जुड़ी होती है।

2. जांच के तीसरे छोर पर एक गैर-प्रतिदीप्ति शमन समूह (एनएफक्यू) है।

3. एमजीबी का हिस्सा एनएफक्यू से जुड़ा हुआ है, और एमजीबी जांच की लंबाई बढ़ाए बिना एनीलिंग तापमान (टीएम) बढ़ाता है, इसलिए एक छोटी जांच डिजाइन की जा सकती है, लेकिन 13 बीपी से कम नहीं।

4. सिद्धांत रूप में, जब तक एमजीबी जांच में आधार उत्परिवर्तन होता है, एमजीबी इसका पता लगा सकता है (एमजीबी जांच लक्ष्य जीन से बंधेगी नहीं और फ्लोरोसेंट सिग्नल उत्पन्न नहीं करेगी)।

केवल अनुसंधान उपयोग के लिए!

लोकप्रिय टैग: यूडीजी (कोई रॉक्स नहीं) के साथ 2×मल्टीप्लेक्स जांच क्यूपीसीआर मास्टर मिक्स, चीन यूडीजी (कोई रॉक्स नहीं) के साथ 2×मल्टीप्लेक्स जांच क्यूपीसीआर मास्टर मिक्स निर्माता, आपूर्तिकर्ता, कारखाने