वन-स्टेप रैपिड माइकोप्लाज्मा डिटेक्शन किट (आइसोथर्मल एम्प्लीफिकेशन मेथड)

किट इज़ोटेर्मल एम्प्लीफिकेशन तकनीक और दृश्य रंग परिवर्तन द्वारा सेल कल्चर माध्यम में आठ प्रकार के माइकोप्लाज्मा का तुरंत पता लगा सकती है। डीएनए निष्कर्षण के बिना, 1 μL सेल कल्चर सतह पर तैरनेवाला सीधे प्रतिक्रिया समाधान में जोड़ा गया था और 30 मिनट के लिए 65 डिग्री पर प्रतिक्रिया की गई थी। सकारात्मक नमूने का रंग पीले से लाल हो गया, और पूरी प्रक्रिया में इलेक्ट्रोफोरेसिस के लिए पीसीआर उपकरण या खुले ढक्कन की आवश्यकता नहीं होती है, जो एरोसोल के कारण होने वाले क्रॉस संदूषण से प्रभावी ढंग से बच सकता है। पारंपरिक पीसीआर विधि की तुलना में, इस उत्पाद में सरल ऑपरेशन, उच्च संवेदनशीलता के फायदे हैं, और संस्कृति माध्यम में विभिन्न प्रकार के पीसीआर अवरोधकों को सहन कर सकते हैं, इसलिए कोई गलत नकारात्मक घटना नहीं है, और पता लगाने के परिणाम क्यूपीसीआर के साथ अत्यधिक सुसंगत हैं।

गीली बर्फ के साथ भेजा गया और -20 डिग्री पर संग्रहित किया गया; 12 महीने तक के लिए वैध।

a: इसमें क्रोमोजेनिक एजेंट होते हैं।

शुरू करने से पहले (कृपया ध्यान से पढ़ें)

65 डिग्री वॉटर बाथ या मेटल हीटिंग ब्लॉक पहले से स्थापित करें।

1. परीक्षण के लिए नमूना तैयार करना:

एक। अनुवर्ती कोशिकाएँ: सतह पर तैरनेवाला को सीधे अवशोषित करती हैं। यह सुझाव दिया जाता है कि नमूने तब लिए जाने चाहिए जब कोशिका टीकाकरण या तरल परिवर्तन 3 दिनों से अधिक हो और संगम की डिग्री लगभग 90% हो। इस समय, सतह पर तैरनेवाला में माइकोप्लाज्मा की सामग्री अधिक होती है और इसका आसानी से पता लगाया जा सकता है।

बी। सस्पेंशन कोशिकाएं: सतह पर तैरनेवाला 5 मिनट के लिए 1, 000 आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद प्राप्त किया गया था। यह सुझाव दिया जाता है कि नमूने 3 दिनों से अधिक समय तक कोशिका टीकाकरण या द्रव परिवर्तन के बाद लिए जाने चाहिए, जब कोशिका संवर्धन माध्यम में माइकोप्लाज्मा की मात्रा अधिक होती है और आसानी से पता लगाया जा सकता है।

2. प्रतिक्रिया प्रणाली

ए: पिघलने के बाद माइकोर्ड बफर का उपयोग उल्टा किया जाता है।

बी: नमूनों की संख्या के अनुसार, उपरोक्त प्रतिक्रिया प्रणाली तैयार होने के बाद, इसे प्रतिक्रिया ट्यूब में उप-पैक करें, 20 μL पैराफिन तेल जोड़ें, और फिर अगले चरण पर आगे बढ़ें।

3. नमूने जोड़ें

एक। नकारात्मक नियंत्रण: नकारात्मक नियंत्रण के रूप में पहली प्रतिक्रिया ट्यूब में कोई नमूना नहीं जोड़ा गया था।

बी। सकारात्मक नियंत्रण: 1 μL सकारात्मक नियंत्रण को अंतिम प्रतिक्रिया ट्यूब में सकारात्मक नियंत्रण के रूप में जोड़ा गया था।

सी। परीक्षण किया जाने वाला नमूना: शेष प्रतिक्रिया ट्यूब में 1 μL सेल कल्चर सतह पर तैरनेवाला जोड़ें।

ए: कृपया नमूने जोड़ने के लिए पैराफिन ऑयल के तरल स्तर के नीचे पिपेट युक्तियों के सिर को बढ़ाएं।

4. प्रतिक्रिया की स्थिति

30 मिनट तक इनक्यूबेट करने के लिए प्रतिक्रिया ट्यूब को पहले से गरम 65 डिग्री पानी के स्नान या धातु स्नान में स्थानांतरित करें। यदि रंग का विकास स्पष्ट नहीं है तो प्रतिक्रिया समय को 40 मिनट तक बढ़ाया जा सकता है।

प्रतिक्रिया समाप्त होने के तुरंत बाद प्रतिक्रिया ट्यूब को बाहर निकालें, और यदि प्रतिक्रिया समाधान कमरे के तापमान पर बहाल होने के बाद भी पीला है, तो परिणाम नकारात्मक होगा। यदि प्रतिक्रिया समाधान लाल हो जाता है, तो परिणाम सकारात्मक है। प्रतिक्रिया ट्यूब को नहीं खोला जाना चाहिए, अन्यथा यह आसानी से एयरोसोल प्रदूषण को जन्म देगा।

1. प्रतिक्रिया समाप्त होने के बाद प्रतिक्रिया ट्यूब को न खोलें।

2. यह सुझाव दिया जाता है कि फिल्टर तत्व के साथ पिपेट युक्तियों का उपयोग प्रतिक्रिया समाधान तैयार करने की प्रक्रिया में किया जाना चाहिए, और छोड़े गए पिपेट युक्तियों और प्रतिक्रिया ट्यूब को स्व-सीलिंग बैग में डाल दिया जाना चाहिए और समय पर निपटाया जाना चाहिए।

3. कृपया टेस्ट बेंच और पिपेट को बार-बार पोंछने के लिए न्यूक्लिक एसिड स्केवेंजर (अनुशंसित G3020) का उपयोग करें।

केवल अनुसंधान उपयोग के लिए!

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